HPV E6E7 mRNA表达水平与宫颈病变病理级别的相关性

马 梅

郑州大学第五附属医院病理科，郑州 450000

宫颈病变是女性常见宫颈疾病，高发于45岁以上女性，患者发病后，病程迁延可发展为宫颈癌。人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌致病的主要因素，HPV E6E7致癌基因的过度表达是宫颈病变发展的主要因素［1-2］。近年来，临床医学对宫颈病变进行早期筛查，已不再局限于细胞形态学，而转向了病毒分子学，即对癌基因及其蛋白表达水平进行检测。第一代检测技术主要检测HPV DNA，其运用具有一定局限性，而第二代检测技术变为检测HPV E6E7信使核糖核酸（mRNA），对预测机体感染后病变、反应病毒感染、癌基因整合及转录翻译情况有一定优势［3］。鉴于此，本研究选取了70例疑似宫颈病变患者，进一步探讨HPV E6E7 mRNA表达水平与宫颈病变病理级别的相关性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月—2019年1月间于郑州大学第五附属医院收治的70例可疑宫颈病变患者的临床资料，患者年龄20～77岁，平均年龄（48.26±5.15）岁；已婚59例，未婚11例，文化程度：小学及以下13例，初中19例，高中18例，大学及以上20例。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 入选标准

纳入标准：（1）患者因接触性出血、性交痛、白带增多或有腥臭味、异常阴道流血或排液等症状到我院就诊；（2）均于本院择期行HPV E6E7 mRNA定量检测及病理学诊断；（3）患者及家属签署知情同意书。排除标准：（1）妊娠及哺乳期妇女；（2）合并子宫恶性肿瘤；（3）3 d内进行过阴道用药或冲洗；（4）表达障碍或精神疾病者。

1.3 方法

HPV E6E7 mRNA定量检测：消毒，患者取膀胱截石位，用无菌棉球擦拭宫颈分泌物，用HPV取样管收集宫颈口及宫颈管脱落细胞，装入保存液中。采用科蒂亚生物技术有限公司生产的QuantiVirusTM冷光仪及配套试剂盒定量测量HPV E6E7 mRNA。判定标准为拷贝数，拷贝数≥1copies/mL为阳性，拷贝数＜1copy/mL为阴性。病理学检查：在患者移行带3、6、9、12处采用宫颈管搔刮术取样，送至病理科医师处进行标本制片及阅片诊断。

1.4 评价指标

（1）比较不同病理级别患者HPV E6E7 mRNA表达量的分布情况。（2）评估病理级别与HPV E6E7 mRNA表达量的相关性。病理级别包括：宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级、宫颈癌Ⅰ期及Ⅱ期。

1.5 统计学方法

宫颈病变病理级别与HPV E6E7 mRNA表达水平相关性采用Pearson相关性分析，数据采用SPSS 24.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用F检验；计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病理级别HPV E6E7 mRNA表达量分布

随病理分级增加，HPV E6E7 mRNA表达量升高，不同病理级别HPV E6E7 mRNA表达量比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 相关性

经Pearson相关性分析发现，宫颈病变病理级别与HPV E6E7 mRNA总表达水平呈正相关，差异有统计学意义（r=0.651，P=0.035）。

3 讨论

宫颈病变在经历宫颈上皮增生、宫颈上皮不典型增生、原位癌等阶段后，演变成宫颈癌。该病起初由HPV感染导致，HPV具有宿主特异性，可感染人体特异部位的皮肤及粘膜使上皮细胞排列紊乱、分化不良、异常增殖、核大深染，因此导致恶变［4-5］。HPV主要通过性接触传播，因此宫颈病变患者的年龄、机体免疫力、性伴侣个数、生育情况等均与宫颈病变有关。研究表明，在我国，超过半数女性有感染HPV可能，因此对HPV进行早期发现、病毒载量测定及疾病准确分型，对控制患者病情进展，预防宫颈癌发病有重要意义［6-7］。

表1 不同病理级别HPV E6E7 mRNA表达量分布（±s） copies/mL

表1 不同病理级别HPV E6E7 mRNA表达量分布（±s） copies/mL

病理级别表达量CINⅠ级11 672.35±243.61 CINⅡ级26 391.56±1253.78 CINⅢ级28 640.59±1463.21宫颈癌Ⅰ期49 218.63±2683.25宫颈癌Ⅱ期95 638.49±2842.65 F P 3 086.906 0.000

过往临床常用的检测方式为HPV DNA，其原理为观察宫颈上皮细胞形态及测定细胞内HPV DNA病毒载量，该方法具有操作方便、检测用时较短、成本低的优势。但在临床实践中，该方法误诊率较高。由于大部分患者感染HPV后临床症状轻，存在亚临床感染，HPV DNA检查仅可用于确定病因，而不能判断病毒的活动程度，导致该方法逐渐被淘汰。而HPV E6E7 mRNA作为一种新型检测方法，被证实有一定优势。本研究结果显示，随病理分级增加，P25、P50、P75、QR的HPV E6E7 mRNA表达量均升高，宫颈病变病理级别与HPV E6E7 mRNA表达水平呈正相关，表明HPV E6E7 mRNA表达水平可作为评估宫颈病变病情严重程度的重要指标，具有较高临床应用价值。分析其原因在于，HPV病毒由多种基因组成，E6和E7是其中两种癌基因，其过度表达可驱动宫颈细胞持续恶性转化。HPV E6E7 mRNA检测的是有转录活性的病毒，可检测E6及E7两种癌基因的表达量，若HPV E6E7 mRNA拷贝值越高，表明基因表达相对活跃，疾病进展可能性大［8］。因此，通过HPV E6E7 mRNA检测，可有效判断病毒有无整合到宿主细胞中，准确反应病毒感染状态及患者病理状态，便于预测宫颈病变发展为宫颈癌的危险程度。

综上所述，HPV E6E7 mRNA表达水平可作为评估宫颈病变病情严重程度的重要指标，具有较高临床应用价值。