感染高毒力球孢白僵菌的大蜡螟幼虫转录组分析

张 力,李敬龙

齐鲁工业大学(山东省科学院) 生物工程学院,生物基材料与绿色造纸国家重点实验室,济南 250353

大蜡螟(Galleriamellonella)是一昆虫纲,鳞翅目,螟蛾科昆虫,其免疫特点与哺乳动物近似,体内蛋白质含量极其丰富,利用其生长繁殖周期短等特点,常常被广泛应用在病原菌感染模型当中,以此来研究致病的机制和相关基因转录组的分析[1-2]。

球孢白僵菌(Beauveriabassiana)在国内外被用于害虫的生物防治实验与研究,且取得很好的对害虫持续性的消除控制功效,其被广大科学研究者称为最具开发潜力的昆虫病原真菌之一[3-4]。实验室从大蜡螟上分离得到6个样品并进行转录本的对比分析,共检测到12 770个共表达的基因。我们利用转录组测序技术分析了大蜡螟幼虫,在受白僵菌侵染的免疫应答相关基因,使用 TRIzol 法,利用苯酚等物质从感染了 B6 菌株和感染野生菌株的 3 d的大蜡螟幼虫(200 mg)中分离提取出总 RNA,并对其进行定性和定量分析,研究高毒力菌株侵染的大蜡螟幼虫的转录组变化情况,为从分子学水平上应用白僵菌防治生物害虫的研究奠定信息学基础。

1 材料与方法

1.1 菌株和供试昆虫

实验中使用的球孢白僵菌野生菌株B.bassianaARSEF2860,由实验室保存。实验中使用的球孢白僵菌高毒力菌株为实验室通过ARTP和FACS诱变筛选得到。

1.2 白僵菌侵染

将4龄的大蜡螟幼虫分别浸泡在浓度为107个/ml的野生型和高毒力菌种B6的分生孢子悬浮液中,以浸泡在0.02%无菌吐温-80中的大蜡螟幼虫作为对照组进行试验。……