外周血不同预处理方法及储存时长对RNA 质量的影响

张佳怡，徐倩南，刘希玲，李成涛，2

1.司法鉴定科学研究院 上海市法医学重点实验室 司法部司法鉴定重点实验室 上海市司法鉴定专业技术服务平台，上海 200063；2.内蒙古医科大学法医学教研室，内蒙古 呼和浩特 010030；3.南方医科大学法医学院，广东 广州 510515；4.四川大学华西基础医学与法医学院，四川 成都610041

近年来，通过研究信使RNA（messenger RNA，mRNA）、微RNA（microRNA，miRNA）和环状RNA（circular RNA，circRNA）等具有组织特异性和不同发育阶段表达特异性的生物学遗传标记，发现了RNA 在法医物证学中独特的应用价值，如基于高通量测序技术和微阵列技术筛选具有特异性表达的基因，并结合实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，分析体液斑的生物成分，进一步鉴定体液的组织来源[1]；也可应用于年龄推断[2]、死亡时间推断[3]和损伤形成时间推断[4]等方面。然而，RNA 相关实验研究的结果与样本RNA 的质量密切相关。

外周血是法医物证学日常检案及研究中较为常见的生物学检材。尽管高质量的RNA 可通过立即从新鲜外周血中抽提得到，但在实际检案中，外周血样本多不具备立即抽提的条件。因此，如何保存外周血样本从而获得高质量的RNA 至关重要。目前常用的RNA 抽提前血样保存的方法主要有低温冻存、PAXgene 全血RNA 管保存、样本中添加RNA 保存液等[5]。低温冻存是目前较为普遍的一种血样处理方法，使用乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝管采集并储存外周血，过程简便、无须额外处理且可避免外源性因素的影响，但外周血中RNA 容易受内源性因素［如大量存在的核糖核酸酶（ribonuclease，RNase）[6]］的影响，在收集和储存过程中RNA 易发生降解。……