应用种特异性ITS引物（SS-ITS）鉴别新菠萝灰粉蚧

徐淼锋 闫邦奇 管维 廖力 蔡波 李惠萍

摘要 [目的]研究新菠蘿灰粉蚧的种特异性ITS引物，以快速准确鉴定该虫，可为口岸快速通关提供依据。[方法]采用PCR扩增方法，首次测定分析了11 种粉蚧39 个样品的新菠萝灰粉蚧及其他粉蚧的rDNA ITS全序列。基于ITS区序列差异设计了针对新菠萝灰粉蚧的特异性引物，通过筛选引物退火温度、优化PCR反应条件建立了新菠萝灰粉蚧的快速分子鉴定方法。[结果]种特异性ITS引物只对新菠萝灰粉蚧有扩增条带，能有效扩增出约665 bp的DNA片段，其余种类均未有扩增条带。灵敏度试验结果显示该对引物灵敏度高，其检测限可达0.1 ng/μL。[结论]采用设计的ITS区种特异性引物可以对新菠萝灰粉蚧进行快速分子鉴定，该方法可为口岸一线检测鉴定提供参考。

关键词 新菠萝灰粉蚧; 分子鉴定; 核糖体DNA

中图分类号 S41;Q96 文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）03-0137-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.03.037

Abstract [Objective]The speciesspecific ITS primer for D.neobrevipes was studied to rapidly and accurately identify the pests，which can provide the basis for the port customs clearance.[Method]The complete fragments of rDNA ITS were sequenced by universal primer PCR amplification method for 39 samples of eleven species including D.neobrevipes and other mealybugs.Speciesspecific primer of D.neobrevipes was designed based on sequences variation of rDNA ITS among the eleven mealybugs.A rapid molecular identification method for D.neobrevipes was established by screening primer annealing temperature and optimizing PCR reaction conditions.[Result] The ITS speciesspecific primers only amplified the band of D.neobrevipes，and could effectively amplify DNA fragments of about 665 bp.And the other species did not have amplified bands.The sensitivity test results showed that the primer had high sensitivity and the detection reached to 0.1 ng/μL.[Conclusion]The rapid molecular identification for D.neobrevipes using the ITS speciesspecific primers designed in this paper is feasible.This method provides reference for the detection and identification of the port.

Key words Dysmicoccus neobrevipes;Molecular identification;Ribosome rDNA

新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes Beardsley）隶属半翅目（Hemiptera）粉蚧科（Pseudococcidae）灰粉蚧属（Dysmicoccus），为我国禁止进境植物检疫性有害生物，严重危害多种水果和观赏植物，是具有重要经济意义的害虫[1-3]。该虫与近似种菠萝灰粉蚧（D.brevipes）在形态特征、寄主植物及分布区域等方面都极为相似。近年来，我国从菲律宾、越南、泰国、印度尼西亚、韩国、柬埔寨、马来西亚和我国台湾等地进口的菠萝、菠萝蜜、香蕉、龙眼、榴莲、番荔枝和山竹等寄主上截获过以上2种粉蚧[4]，据统计在2005—2017年，共截获3 111 批次新菠萝灰粉蚧和2 392 批次菠萝灰粉蚧。目前，新菠萝灰粉蚧在我国海南和广东有危害报道，且呈急剧蔓延扩散趋势[2]。……