核酸固相分离方法及其在病原PCR诊断中的应用综述

李蒙航，赵振军，李佩佩*

(1.辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁 大连 116023； 2.大连理工大学，辽宁 大连 116024)

基因是遗传的主要功能单位，它们所包含的核酸碱基的特定序列能够编码生物体功能所需的大部分蛋白质。作为基因的载体，2种类型的核酸：核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)或脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid，DNA)受到广泛关注，尤其是基于核酸的体外分子检测技术，成为强大的生物学研究工具[1-2]。基于核酸的PCR(Polymerase Chain Reaction)诊断比传统方法(基于酶或者抗体的分析)具有更多的优势：更高的修改灵活性、更高的检测灵敏度以及更快、更早的获得检测结果[3]，在人类疾病控制(如艾滋病[4]、疟疾[5]和丙型肝炎[6]等)、农作物病害控制[7]、畜牧业疫病防控[8]和食品安全领域[9]均发挥着极其重要的作用。PCR诊断包括多个关键环节：核酸的提取，聚合酶链反应(PCR)及结果读出[10]。从生物体中提取核酸，需要将核酸从含有蛋白质、多糖和脂肪等多种生物大分子的复杂体系中进行分离、纯化，是PCR、测序等生物学分析的先决条件[11]。核酸提取的质量，会显著影响后续分析的准确性和灵敏度。生物样本中残留的抑制性成分(血红素、球蛋白等成分)及分离、纯化过程中残留的有机物和盐分，是影响PCR灵敏性和分析稳定性的重要因素[12-14]。

传统的核酸的分离方法是基于有机溶剂萃取的液相分离，如Chomczynski’s法[15]、酚氯抽提方法[16-17]、溴化乙锭-氯化钙梯度离心法等[18]。液相分离方法虽然有效，但存在着很大的局限性：所需样品量大、分离时间长、易受污染、降解率高[19]。另外，液相分离方法中有机溶剂的残留显著增加了PCR抑制剂的残留风险。……