轮状病毒感染实验室诊断研究进展

谈伟，陈咏妍，张欣欣

上海交通大学医学院附属瑞金医院临床病毒研究室, 上海 200025

轮状病毒属于呼肠孤病毒科，其颗粒直径为 70～75 nm，无包膜，双层衣壳，具有11个节段的双链RNA[1]。轮状病毒体核心RNA全长约为18.5 kb，编码11～12个蛋白，其中包括6个结构蛋白(VP1～VP4，VP6，VP7)和5个非结构蛋白(NSP1～NSP4，NSP5/NSP6)。轮状病毒有10种亚型(轮状病毒A～J)，其中轮状病毒A引起的感染占轮状病毒感染病例的90%以上[2]。在6个结构蛋白中糖蛋白VP7和蛋白酶敏感蛋白VP4位于外衣壳，是轮状病毒双重分类系统的依据[3]。在A组轮状病毒中，根据VP7抗原性不同可分为不同的G血清型，其中G1～G4在人群中最流行；根据VP4抗原性不同可分为不同的P血清型，以P1A型为常见型。在临床诊断和鉴别中，主要以病毒基因型分型作为诊断依据。G血清型与基因型的表述一致；P血清型与基因型表述不一致，基因型用中括号“[]”表示(如血清型P1A即为基因型P[8]，P1B即为基因型P[4]，P2A即为基因型P[6])。其中6个G型(即G1，G2，G3，G4，G9和G12)和3个P型(P[4]，P[6]和P[8])的轮状病毒感染率更高[4]。

传统的轮状病毒检测是运用电子显微镜(electron microscope，EM)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测轮状病毒颗粒及其抗原，这类传统方法繁琐、检出率低且耗时很长，已经很少使用。目前，临床上检测轮状病毒主要采用胶体金免疫层析法 (gold immunochromatography assay, GICA)和反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)。GICA满足了临床检测方法应简单、快速的要求；RT-PCR从基因层面检测轮状病毒，具有高特异性、高敏感性的特点。但是，GICA敏感性不足，当病毒载量较低或抗原发生突变时就会出现假阴性；RT-PCR反转录合成cDNA操作复杂、容易污染、扩增耗时较长。……