消瘀泄浊饮介导PI3K/Akt/mTOR信号通路改善糖尿病肾病小鼠肾纤维化*

陈 峰 徐瑜琳 陈红波 项晓骏#

1 湖州南太湖医院 浙江 湖州 313008

2 浙江省中医院 浙江 杭州 310018

组织纤维化可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路介导，且糖尿病肾病(DN)肾纤维化进展也与调控该信号通路相关。动物实验表明，对于肾损伤、肾纤维化大鼠，消瘀泄浊饮可通过抑制该信号通路发挥保护肾功能的作用[1-3]。基于此，本研究通过DN模型，分析消瘀泄浊饮对DN小鼠肾纤维化和肾损伤的保护作用，并探讨潜在机制，为临床治疗DN提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物：60只6周龄糖尿病模型（db/db）小鼠购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物生产许可证号SCXK(沪)2017-0015；饲养于浙江中医药大学动物实验中心，饲养许可证号SYXK(浙)2018-0012。自由饮食饮水。

1.2 主要材料与仪器：消瘀泄浊饮颗粒剂（炙黄芪20g，车前草15g，制大黄、酒地龙、桃仁、川牛膝各10g，江苏天江药业有限公司），完全溶解于600ml灭菌水中煎煮1h，共煎2次，混合于旋转蒸发器浓缩，制备消瘀泄浊饮药液(0.96g/ml)，4℃冰箱中贮存。根据人的体重与剂量进行换算，配制高、中、低3个浓度的中药，分别为7.5、15、30g/（kg·d）(60kg成人的消瘀泄浊饮每日剂量为 96g)。Anti-beta Actin、Anti-pan-AKT、Anti-AKT、Anti-TGF beta 1抗体(批号：ab8226、ab8805、ab38449、ab92486)购于Abcam；mTOR、p-mTOR、p-PI3K、PI3K抗体(批号：AF6308、AF3308、AF3242、AF6242)购于Affinity。苏木素染液、DAB kit(批号：MD911467、MD912068)购于MDL。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号：IC-SOD-Ra、IC-MDA-Ge)购于IC/IBL。ASP200S全自动脱水机、G1150 H加热石蜡包埋系统(Leica)。

1.3 制备DN肾纤维化模型与分组：适应性喂养1周后，尾静脉采集db/db小鼠血标本，对空腹血糖值进行测量，若出现＞11.1mmol/L，则视为造模成功。选取同周龄db/m小鼠12只，设为正常组。阳性对照组给予16mg/（kg·d）厄贝沙坦，消瘀泄浊饮低、中、高剂量组(XXD-L组、XXD-M组、XXD-H组)分别给予7.5、15、30g/（kg·d）消瘀泄浊饮；……