DNA微阵列芯片技术检测培阳肺结核患者痰样本中结核分枝杆菌耐药性的价值

王 悦，孙 颖，孙炳奇

结核病(TB)位居全球单一致死性传染病的首位(排在HIV/AIDS之前)，每年约有50万利福平耐药病例，其中78%为耐多药结核病(MDR-TB)。我国是全球耐药结核病负担最大的3个国家之一。异烟肼(INH)和利福平(RIF)的广泛使用及菌体基因突变加剧了耐药性的发生[1-3]。实际工作中，由于传统的药敏试验方法费时、繁琐，无法满足快速临床诊断的要求[4-5]。目前，许多快捷高效的分子技术已成功应用于MTB检测，包括实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、线性探针耐药检测分析(LPAs)和寡核苷酸或DNA微阵列等。

DNA微阵列技术(基因芯片耐药基因检测技术)是指在rpoB、inhA和katG基因的特定位置结合特异性核苷酸，检测痰标本中MTB对于利福平和异烟肼的耐药情况。

本研究以MGIT 960药敏试验为参考标准，验证芯片法对MDR-TB的检测能力。对于芯片法与液体药敏检测不一致的结果，采用WHO推荐的线性探针耐药检测法进行复核，以期客观的探讨芯片法对培阳结核病患者的耐药性的检测能力。

1 材料与方法

1.1材 料

1.1.1研究对象 收集沈阳市第十人民医院2019年7至12月间，389名疑似肺结核患者的合格痰样，排除标准为治疗超过两周的患者。年龄分布为2～90岁，男性入组280人(72.0%)，女性入组109人(28.0%)。本课题已通过沈阳市第十人民医院伦理委员会批准。

1.1.2主要仪器及试剂 晶芯○R微阵列芯片扫描仪LuxScanTM10K-B，Extractor 36 核酸快速提取仪，HybSet基因微阵列芯片杂交盒，结核分枝杆菌耐药检测试剂盒，北京博奥晶典生物集团有限公司；MGIT960全自动结核分枝杆菌快速培养法仪及配套试剂，美国BD公司；……