一例羊大肠杆菌病的诊治

张 燕，韩 悦，周博宇，于龙政

（延边大学 农学院，吉林 延吉 133000）

羊大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的传染病，临床表现常见于肠炎，有时引起败血症和毒血症，导致动物急性死亡。由于该疾病的急性发作、快速死亡和无法治疗，通常给养殖场（户）造成很大的经济损失。本文主要对延吉某养羊场的耐药性大肠杆菌进行分离鉴定，旨在为大肠杆菌的临床诊断和有效控制提供理论依据。

1 发病情况

延吉某养羊场目前羊只存栏量为500只。从2019年9月3日开始，每天有羊只死亡，且数量不断增加。发病症状表现为腹泻、流鼻涕、咳嗽，发病期间养殖户用青霉素对病羊进行治疗，但疗效并不明显，随后到延边大学动物医院就诊。

2 实验室检测

2.1 细菌分离培养与形态学观察

对送检的患病羊鼻拭子涂布于麦康凯固体培养基，37℃需氧培养24 h。挑取部分生长良好的单个菌落，按照标准细菌染色法对其进行革兰氏染色，镜检。革兰氏染色结果表明，分离菌为革兰氏阴性无芽孢的直杆菌，两端钝圆，疑似大肠杆菌。将剩余部分菌落接种于液体培养基，观察发现小凸起的圆形红色菌落，其边缘整齐，表面光滑。

2.2 生化鉴定

对分离菌株进行单菌落划线培养纯化后，开展吲哚试验及MR试验，试验结果均呈阳性，并采用细菌微量生化反应管进行发酵糖试验，结果表明分离菌能够发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。将试验结果对照《伯杰氏细菌鉴定手册》，符合大肠杆菌的生化特性，将该菌株命名为DC001株。

2.3 细菌菌落PCR鉴定

将保存的菌液作为模板，以1492R:5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'和27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'为引物扩增，PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳，获得约1 407 bp的片段，与预期大小一致。将PCR产物送往吉林省库美生物科技有限公司测序。测序结果经BLAST比对，表明分离菌与美国国家生物技术信息中心（NCBI）收录的大肠杆菌序列（GenBank登录号分别为KC136138、MF399285、MH671483、MK621243、MK691481、MK778500、MN557058）相似度在99.9%以上。

2.4 药敏试验

通过K-B纸片琼脂扩散法进行药敏试验。将分离出来的细菌接种到普通琼脂培养基上，并贴上常用的抗生素药敏片，在培养箱中培养24 h。根据培养皿中各种抗生素药敏片周围抑菌圈的大小来筛选敏感的抗生素药物。试验结果表明：分离菌对头孢喹肟、万古霉素敏感，对诺氟沙星、环丙沙星中度敏感，对青霉素、氨苄西林、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、四环素、氯霉素、红霉素、螺旋霉素、林可霉素、复方新诺明均耐药。

3 临床诊断及治疗

结合临床症状、相关试验结果，诊断该羊场出现连续羊只死亡的原因为致病性大肠杆菌感染，因此选用头孢喹肟对症治疗。按照2 mg/kg体重颈部肌肉注射，每天用药1次，连续治疗2 d后病情得到了缓解，治疗5 d后病情得到了控制。

4 讨论

羊大肠杆菌病病原属肠杆菌科，埃希菌属中的大肠埃希菌，此菌在羊肠道内正常寄居，构成固定的细菌群，当羊正常生理机能受到破坏，羊肠道内微生态环境发生改变，导致大肠杆菌的生物特性发生变化，由正常菌群转变成致病菌群，对出生不久、抵抗力不强的羔羊更为明显[1,2]。

本试验对病羊的鼻拭子进行了分离纯化和细菌传代培养，从形态学和生化特征上判定为大肠杆菌，并通过16S rDNA PCR扩增和测序分析，在分子水平上证实分离菌为大肠杆菌。由于大肠杆菌对人类具有传染性，因此养殖户应避免与病羊密切接触。

近年来，由于抗生素大范围的不合理使用，导致大肠杆菌的耐药谱、耐药范围、耐药率及多重耐药性都呈上升趋势[3,4]。本次药敏试验结果表明：该分离菌具有广谱的耐药性，对试验中15种抗生素中的11种具有不同程度的耐药性，且其中8种抗生素抑菌圈直径为0。细菌抗药性的产生和传播是相当复杂的，会受到所用药物类型、药物治疗方案、动物种类和管理模式影响。因此，在使用抗生素预防和治疗疾病时，应遵循相关原则，并考虑各种因素对耐药性产生的影响，以提高临床效果。

大肠杆菌是条件病原体，广泛存在于动物有机体的内部和外部环境中。当养殖场（户）饲养管理、疾病防控工作落实不到位时，羊群抵抗力下降，很容易受内源性或外源性因素的影响而感染大肠杆菌[5]。该羊场已建多年，多种设施老化陈旧，且9—10月份季节更替，早晚温差较大，都可能是本次疾病暴发的原因。