白毛藤多糖对人卵巢癌A2780/DDP 细胞增殖和凋亡的影响

张杰，杨骄霞，翟凤国，周福波，林峰，李厚忠，杨旭东＊

（1.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011；2.牡丹江医学院附属红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011）

0 引言

顺铂(cisplatin，DDP)作用强、抗肿瘤谱广泛，对卵巢癌疗效显著，是化疗中常用的药物。其作用机制主要是诱发DNA 单链内或双链间相邻鸟嘌呤产生交联进而破坏DNA，抑制细胞DNA 自我复制[1-2]，但长期使用顺铂往往产生耐药性，限制其在临床化疗的应用。白毛藤（Solamum lyratum Thunb）属于茄科植物，具有消肿、解毒等作用。本课题组前期实验证实，白毛藤的不同组分对多种肿瘤细胞具有生长抑制等作用[3-4]，本研究旨在进一步观察白毛藤多 糖（Solamum lyratum Thunb polysaccharide，SLTP）在逆转A2780/DDP 人卵巢癌顺铂耐药中的作用及其分子机制，为SLTP 应用于卵巢癌的辅助化疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

A2780/DDP 人卵巢癌顺铂耐药细胞株，购于中科院上海细胞库。四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)、RPMI-1640 培养液和RNA 提取试剂(Trizol) (美国Sigma公司)，胰酶（美国Gibco 公司），DDP（德州德药制药有限公司），RT-PCR 试剂盒及引物（大连宝生物有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞分组

实验分为4 组，空白对照组（含A2780/DDP 细胞的RPMI-1640 培养液）、顺铂组（2µg/mLDDP）、顺铂+低剂量SLTP 组（2µg/mLDDP+0.4mg/mLSLTP）、顺 铂+高剂量SLTP 组（2µg/mLDDP+1.6mg/mLSLTP）。

1.2.2 测定药物敏感性的MTT 实验

将对数生长期A2780/DDP 细胞，以5×103个/mL细胞密度，接种至96 孔培养板上，每孔100 μL。按照细胞分组，分别加入不同浓度DDP 和SLTP，每个浓度设5 个复孔。分别孵育12，24 和48h 时各加入5g/LMTT20μL 溶液；继续培养4h，吸去全部上清液，每孔加100μLDMSO，酶标仪测定波长490nm 的各孔OD 值。细胞抑制率（inhibition rate，IR）=（对照组OD-实验组OD）/（对照组OD-空白组OD）×100%。

1.2.3 Hoechst33258 检测细胞凋亡

按照Hoechst33258 荧光染料试剂说明书检测A2780/DDP 细胞凋亡情况。……