张月宁,康 媛,姬 超
陕西省第二人民医院妇产科,陕西西安 710005
卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一[1],早期症状不典型,难以及时诊断,多数患者确诊时已是中、晚期,治愈率非常低,是女性肿瘤死亡的主要原因,且近年来发病率有逐渐升高趋势[2]。研究卵巢癌的发病机制,对临床治疗具有重要意义。研究显示,微小RNA-145(miR-145)在多种肿瘤组织中表达水平降低[3],其可作为一种抑癌基因参与调控肿瘤细胞的生长、增殖、转移等多个环节[4-5]。基质金属蛋白酶(MMP)是一种锌离子依赖的蛋白水解酶,能够降解基底膜和细胞外基质,可广泛参与机体内肿瘤侵袭、转移,组织的发育、修复,以及炎性反应等病理、生理过程。MMP-2及MMP-9是MMP家族中的重要成员,在肿瘤侵袭和转移中发挥着重要作用[6]。本研究通过分析miR-145对卵巢癌细胞凋亡、增殖、迁移的影响,以及miR-145与MMP-2、MMP-9表达水平的关系,以期为卵巢癌的临床治疗提供一定参考。
1.1癌细胞株来源 将购于上海素尔生物科技有限公司的卵巢癌细胞株随机分为3组,其中对照组为单纯卵巢癌细胞株,不做其他处理,进行正常培养;miR-145组则是含miR-145质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株;NC组为含NC质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株。
1.2方法
1.2.1细胞培养 将卵巢癌细胞株在含有胎牛血清的DMEM培育液中培养,孵箱培养条件为37 ℃、5% CO2。当卵巢癌细胞生长至80%~90%时,采用胰蛋白酶消化卵巢癌细胞,800 r/min离心5 min,收集、重悬并培养细胞。
1.2.2细胞转染 将卵巢癌细胞稀释至2×105/mL,平铺到24孔板中,待卵巢癌细胞生长至70%~80%时进行转染。……