细小病毒反向遗传操作技术研究进展

赵永强，吴艳虹，韦 韬，丛 丽，岳志刚，肖家美，邵西群

(中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112)

反向遗传学与经典遗传学相对而言，经典遗传学是从生物的表型、性状的改变出发，研究其相对的基因特征，反向遗传学则从生物的基因着手，研究基因的改变对生物表型、性状的影响。反向遗传学操作技术已经广泛应用于各个领域，尤其是病毒的反向遗传学操作，狭义的反向遗传学仅仅是微生物的感染性分子克隆构建。病毒反向遗传学是通过体外构建DNA或者RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒DNA或者cDNA分子水平上对其进行基因敲除、置换等体外人工操作，也被称为“病毒拯救”[1]。许多病毒的反向遗传学系统已建立，成功实现体外病毒拯救。应用体外基因突变、基因插入或者缺失和基因置换来研究生物基因结构和功能都是在反向遗传学技术基础上实现的，目前研究较热的基因敲除、RNA干扰等等都是反向遗传技术的延伸。反向遗传操作技术在病毒上的应用，推动了基因缺失疫苗、标记疫苗的研制，构建嵌合体病毒、突变病毒等。

1 病毒反向遗传学研究的发展

1.1 RNA病毒的反向遗传操作技术

RNA病毒反向遗传操作技术是以构建RNA病毒的感染性分子克隆为基础的。由于RNA病毒自身遗传物质的不稳定，反向遗传学操作的核酸为DNA，因此，获得病毒全基因组序列的逆转录DNA成为该项技术的关键环节之一。正链RNA病毒的主要研究思路是用RT-PCR技术，采用“分段克隆”的方式……