H9亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫保护研究

张盼涛，盛东北，张 亚，田 辉，段佳蕾，刘武杰，田克恭

(国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471000)

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)为低致病性禽流感病毒，是家禽常见的病毒之一[1]。H9N2亚型AIV虽不会导致家禽高发病率和高病死率，但可引起鸡上呼吸道感染，产蛋率下降，损害鸡免疫系统，引起其他病原的继发感染[2]。H9N2亚型AIV不仅影响养禽业的发展，同时也威胁人类公共卫生安全。1998年以来已有多例H9N2亚型AIV感染人的报道，这也加快了全球对该亚型禽流感病毒的研究[3-4]。H9亚型禽流感灭活疫苗有效控制了该病的流行，然而，疫苗免疫失败的现象时有发生，在活禽市场中依然能够检测到大量的H9N2亚型AIV。引起该现象的原因是其HA基因不断发生变异，造成现有疫苗保护力下降[5-7]。本研究从安徽合肥某鸡场分离到1株H9N2亚型禽流感病毒HF株，免疫攻毒保护试验表明该毒株具有良好的免疫原性，为了验证由该毒株制备的灭活疫苗对当前流行毒株的保护效果，筛选2018年和2019年各2株H9N2亚型流行毒株对免疫HF株灭活疫苗和商品化疫苗的SPF鸡进行攻毒保护试验，评估HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫攻毒保护效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒株 10株H9N2亚型禽流感病毒株，包括HF株、A181877-2018株、A181878-2018株、A182078-2018株、A182096-2018株、A190194-2019株、A190543-2019株、A190759-2019株、A190854-2019株和A191001-2019株，来源于河南、湖南、山西、江西、安徽、山东6个省份，均由国家兽用药品工程技术研究中心分离、鉴定、保存。

1.1.2 疫苗 将HF株经灭菌生理盐水稀释至10-3，经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1 mL，37℃孵育96 h，收获鸡胚尿囊液，用终浓度为2 mL/L的甲醛溶液灭活病毒，灭活后进行HA效价测定、无菌检验及灭活检验，检验合格后按照油相∶水相为1∶2的体积比乳化制苗，并对疫苗成品进行性状与无菌检验；……