钙黏蛋白E、Stathmin-1表达在前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发中的预测价值

柯帅，徐消寒，苗明亮

（郑州大学第一附属医院，河南 郑州 450000）

前列腺癌是男性生殖泌尿系统恶性肿瘤，多发于老年人群，具有较高的发病率和病死率[1]。前列腺癌的发生与家族遗传、饮食结构改变、吸烟、性激素水平等因素密切相关，患者常出现排尿、排便困难等局部压迫症状，严重影响患者生活质量和生命安全[1-2]。根治性切除手术是前列腺癌的有效治疗方式，经尿道等离子前列腺剜除术是其中的一种新型微创术式，具有精确切割、组织损伤小等优点，可在完整切除病灶的基础上有效改善患者局部压迫症状[3]。但晚期患者术后仍存在一定的复发率和骨转移率，导致预后较差[3]。因此，积极寻求前列腺癌术后复发的预测指标对于改善患者预后具有重要意义。钙黏蛋白E和Stathmin-1与前列腺癌的发生和发展具有密切联系，下调钙黏蛋白E的表达和上调Stathmin-1的表达均被认为会增加前列腺癌的侵袭和转移风险[4-5]，但二者在前列腺癌经尿道等离子前列腺剜除术后复发中的预测价值仍不明确，尚未见有钙黏蛋白E和Stathmin-1于前列腺癌术后复发关系的研究报道。基于此，本研究主要探讨钙黏蛋白E、Stathmin-1表达在前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发中的预测价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性选取2016年3月至2018年6月期间于我院经手术治疗的108例前列腺癌患者作为研究对象，对其临床资料和癌组织标本进行分析。纳入标准：⑴符合《前列腺癌诊断治疗指南》中前列腺癌的诊断标准[6]者；⑵直肠超声检查显示前列腺增大体积＞30 ml者；⑶均行经尿道等离子前列腺剜除术治疗，并保存癌组织标本者；⑷均完成2年随访，且具备完整的临床及随访资料者。排除标准：⑴合并严重肝肾功能障碍、免疫性疾病者；⑵合并其他恶性肿瘤、严重心脑血管疾病者；⑶合并急性或严重机体炎症反应者；⑷随访资料不完整者。本次研究已通过本院医学伦理委员会的批准。依据入组患者随访2年后的复发或转移情况将其分为两组：有复发或转移的复发组（n=32）和无复发及转移的未复发组（n=76），复发组中年龄55～80岁，平均年龄（65.83±9.64）岁；TNM分期T1期-T2期19例，T3期-T4期13例；并发尿路梗阻21例；平均手术时间（94.46±4.72）min；未复发组中年龄57～83岁，平均年龄（66.17±10.25）岁；TNM分期T1期-T2期31例，T3期-T4期45例；并发尿路梗阻58例；平均手术时间（93.84±4.25）min，与复发组比较无明显差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 组织芯片制备 两组患者的癌组织样本经10%甲醛溶液固定后，常规处理并石蜡包埋，按照病理结果标记组织靶点，准备合适大小的受体蜡块。采用组织芯片制作仪（美国Beecher Instrument公司）制作组织芯片，每个组织芯片含128个位点。制作完成后进行4μm厚度连续切片，切片经常规脱蜡至水后进行EDTA高温抗原修复、PBS冲洗、H2O2孵育，去除内源性过氧化物酶活性。

1.2.2 免疫组织化学染色 按照免疫组织化学试剂盒（北京中杉金桥生物公司）的操作说明进行染色，PBS冲洗3次后滴加正常血清，室温孵育15 min，以兔抗人钙黏蛋白E、Stathmin-1蛋白单克隆抗体（均购自美国Santa Cruz公司）作为一抗，抗体稀释至1:100，4℃过夜。采用PBS冲洗3次后滴加即用型二抗，经孵育15 min、PBS冲洗、DAB显色剂显色、苏木精复染、脱水、封固等操作后，以PBS代替一抗作阴性对照，在显微镜下观察切片染色情况，每张切片至少观察5个高倍视野。

1.2.3 结果判定 钙黏蛋白E、Stathmin-1蛋白的染色结果以细胞膜和（或）细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞，检测结果依据两种蛋白的染色强度和阳性细胞比例进行评分，染色强度无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色或棕褐色为2分；阳性细胞比例：1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。将阳性细胞比例得分与染色强度得分相乘判定最终检测结果，总分1～2分为阴性，≥3分为阳性[7]。

1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对实验数据进行分析，本研究中涉及的计数资料用%表示，采用χ2检验；计量资料采用“±s”表示，两组间比较采用两样本t检验，多因素分析采用Logistic回归模型，采用Spearman进行相关性分析；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 钙黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表达及其与前列腺癌临床病理特征的关系 经免疫组化染色检测后，108例前列腺癌患者中钙黏蛋白E阳性表达47例（43.52%），Stathmin-1蛋白阳性表达79例（73.15%）。不同TNM分期、Gleason评分、术前淋巴结转移情况的前列腺癌患者其钙黏蛋白E和Stathmin-1蛋白的阳性表达率存在明显差异（P＜0.05），不同年龄、术前前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、手术切缘情况前列腺癌患者的钙黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表达无明显差异（P＞0.05），见表1。经Spearman分析结果显示，前列腺癌组织中的钙黏蛋白E和Stathmin-1表达呈负相关关系（r=-0.795，P＜0.05）。

表1 钙黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表达与前列腺癌临床病理特征的关系（n/%）

2.2 前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发的单因素分析 单因素分析结果显示，复发组和未复发组在年龄、术前PSA水平、饮酒史、吸烟史、合并基础疾病及术中出血量方面比较无明显差异（P＞0.05），两组在术前淋巴结转移、钙黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表达方面存在明显差异（P＜0.05），见表2。

表2 前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发的单因素分析（n/%）

2.3 影响前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发的多因素Logisitic回归分析 以前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后是否出现复发作为因变量，将单因素中差异存在统计学意义的因素（术前淋巴结转移、钙黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表达）作为自变量，并进行赋值，术前淋巴结转移（无=0，有=1）、钙黏蛋白E表达（阳性=0，阴性=1）、Stathmin-1蛋白表达（阴性=0，阳性=1），并将其纳入Logisitic回归模型中，结果显示：术前有淋巴结转移、钙黏蛋白E表达阴性和Stathmin-1蛋白表达阳性是前列腺癌患者经尿道等离子前列腺剜除术后复发的独立预测因素，见表3。

表3 影响前列腺癌患者术后复发的多因素Logisitic回归分析

3 讨论

前列腺癌是一种较为常见的男性生殖系统恶性肿瘤，在欧洲老年男性中的发病率较高，致死率较高，严重威胁男性健康与生命安全。经尿道等离子前列腺剜除术在治疗晚期前列腺癌和伴发尿路梗阻方面具有明显优势，可在完整切除前列腺癌灶组织基础上有效解决患者的局部压迫症状，改善患者术后生活质量[8]。但前列腺癌的术后仍存在35%左右的复发率[9]，而传统的临床病理数据难以准确预测某些前列腺癌患者复发或转移。因此，寻找和发掘可靠的生化指标以评估前列腺癌患者术后复发风险就显得尤为重要。

钙黏蛋白E存在于上皮细胞膜上，是参与机体上皮细胞和钙黏蛋白之间组成的一种重要成分，其表达缺失可对机体组织内的细胞黏附情况造成影响，进而影响肿瘤细胞的分化能力[10]。多项研究指出[11-12]，下调钙黏蛋白E的表达可能有助于前列腺癌的侵袭和转移。本研究结果显示，108例前列腺癌患者中钙黏蛋白E阳性表达率为43.52%，钙黏蛋白E在TNM分期T3期-T4期、Gleason评分≥7分和术前有淋巴结转移的前列腺癌患者组织中的阳性表达率相比于T1期-T2期、Gleason评分<7分和无淋巴转移患者明显更低，其中Gleason评分是前列腺癌分级的常用方法，其分数越高，提示前列腺癌的病情程度越严重。由此可见，钙黏蛋白E的低表达与前列腺癌的发生发展密切相关。本研究结果还发现，钙黏蛋白E阴性是前列腺癌患者术后复发的重要影响因素，提示其低阳性表达率可能对于临床上评估患者术后复发具有较好的参考价值。由于钙黏蛋白E表达降低导致其黏附性降低，增加肿瘤细胞之间的解离，进而缺乏接触抑制并开始无线增殖，局部脱落，从而导致其浸润和转移，增加患者复发或转移风险[13]。

Stathmin-1蛋白属于一种微管不稳定蛋白，已被研究报道在胃癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌组织中具有较高阳性表达率，与多种恶性肿瘤的发生密切相关[14]。本研究中结果显示，108例前列腺癌患者中Stathmin-1蛋白阳性表达率为73.15%，Stathmin-1蛋白在TNM分期T3期-T4期、Gleason评分≥7分和术前有淋巴结转移的前列腺癌患者组织中具有较高的阳性表达率，并与钙黏蛋白E呈负相关关系。目前对于Stathmin-1蛋白参与肿瘤恶性转变过程的机制尚不十分清楚，但已有多项研究发现其高表达阳性率与肿瘤的较高增殖活性有关，并能参与恶性肿瘤的转移。本研究还发现Stathmin-1蛋白阳性表达是前列腺癌患者术后复发的独立预测因素，其对前列腺癌复发患者的影响机制可能与Stathmin-1蛋白的高表达影响微管动力和纺锤体的形成，进而影响有丝分裂，使细胞周期分布改变，并影响细胞的生物学行为有关[15]。临床上可将其与前列腺癌钙黏蛋白E一起检测用于指导和预测前列腺癌患者的复发或转移，以尽早采取干预措施，改善患者预后。

综上所述，钙黏蛋白E在经尿道等离子前列腺剜除术后复发患者的组织中呈低表达，Stathmin-1蛋白则呈高表达，钙黏蛋白E表达阴性和Stathmin-1蛋白表达阳性均是前列腺癌患者术后复发的重要影响因素，对于临床上前列腺癌患者术后复发的风险评估具有一定的应用价值。