丹参酮Ⅱa通过AMPK/mTOR通路调节自噬促进急性白血病细胞凋亡作用机制研究*

潘一鸣 李蕊白 黄子明 王 婧 马 薇 陈信义 侯 丽

（北京中医药大学东直门医院，北京 100700）

急性髓系白血病（AML）是起源于造血干祖细胞的恶性克隆性疾病，占成人急性白血病的80%，临床表现为发热、出血、贫血和白血病细胞浸润，起病较急，自然病程仅3个月左右［1］。虽然化疗、支持治疗和造血干细胞移植（HSCT）的进步改善了AML的预后，但60岁以下成人AML的5年生存率仍只有30%～40%，高龄患者更低［2］。寻找新的治疗方法和药物意义重大。丹参是治疗AML的常用中药，其主要有效成分丹参酮Ⅱa具有良好的抗肿瘤活性，但丹参酮Ⅱa在AML中的作用和机制研究尚不充分，本研究通过AML细胞HL-60探究丹参酮Ⅱa体外抗白血病的效应和作用机制。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器 丹参酮Ⅱa（货号HY-N0135，批号28232）、巴弗洛霉素A1（货号HY-100558，批号81280）由MedChemExpress公司生产。IMDM培养基（货号12440061）、青链霉素（货号15140122）、胎牛血清（货号10099141）由Gibco公司生产。CCK-8细胞增殖-毒性试剂盒（Cell Counting Kit-8，货号CK04）由日本同仁公司生产。吉姆萨染液（货号G1015）为Solarbio公司生产。一抗Caspase-3（货号ab32351）、PARP-1（货号ab191217）、LC3B（货号 ab192890）、p-AMPK（货号ab194920）、p-mTOR（货号 ab109268）、β-actin（货号ab8226）抗体由Abcam公司生产。辣根过氧化物酶标记的二抗（货号A0208、A0216）由碧云天公司生产。细胞培养箱（型号FormaTMSeries 3 Water Jacketed CO2Incubator）为Thermo公司产品。细胞光学显微镜（型号DM750）为莱卡公司产品。酶标仪（型号SpectraMax M5）为BioTek Instrments公司产品。蛋白电泳仪（型号Mini-PROTEAN Tetra）为伯乐公司产品。

1.2 细胞 急性髓系白血病细胞HL-60由中国科学院上海细胞库所提供，以含20%胎牛血清、1%青链霉素的IMDM培养基置于37℃、5%CO2的环境中培养，2～3 d换液。

1.3 CCK-8法检测细胞活力及增殖抑制率 取对数生长期细胞，设 0（对照组）、1、2、4、8、16、32、64、128 μmol/L丹参酮Ⅱa组，按1×104个/孔接种于96孔板后加药处理24 h和48 h，并另设仅含培养基的空白组。……