miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

乔思源，江文刚，汪思应

miR-100是定位于人类染色体11q24.1上大小约为22个核苷酸的微小RNA。微小RNA是一类非编码的单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，其通过与靶基因的3′UTR结合而转录后抑制基因表达，以诱导基因或者蛋白质降解。目前对miRNA的研究表明，miRNA几乎在每个细胞过程的调控中都起着至关重要的作用，包括增殖、凋亡、分化和血管生成等。miR-100在多种恶性肿瘤中发挥重要的调控作用，成为了近年来的研究热点。miR-100基因敲除模型的建立可以更好地研究miR-100在各种肿瘤等疾病中发挥作用的机制，从整体水平研究其功能。

miR-100小鼠是在C57BL/6小鼠的miR-100基因两端分别插入一个loxP的位点，所以外观上和C57 BL/6小鼠基本没有差异。而EIIa-Cre小鼠是表达Cre重组酶的工具鼠，可以特异性识别loxP位点从而将loxP位点间的基因敲除。该研究根据以上原理，通过将EIIa-Cre小鼠与miR-100小鼠进行配繁，得到miR-100敲除杂合子小鼠后再进行配繁，从而得到miR-100敲除纯合子小鼠。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级miR-100小鼠雌雄各3只和SPF级EIIa-Cre小鼠雌雄各3只，体质量均在20 g左右，购自南京大学模型动物研究中心， 所有小鼠饲养在安徽医科大学实验动物中心的SPF环境中。经安徽医科大学实验动物中心审批，并严格遵循实验动物使用的原则。

1.2 主要试剂与仪器

琼脂糖粉末(广州赛国生物科技有限公司)；TAE(50X)电泳缓冲液(上海碧云天科技有限公司)；PCR试剂盒(广州赛国生物科技有限公司)；DNA引物(中国赛默飞世尔科技有限公司)；qPCR试剂盒(上海吉玛制药技术有限公司)；PCR扩增仪(普通)(德国耶拿分析仪器股份公司)；……