GASP-1基因干扰对非小细胞肺癌细胞恶性侵袭和上皮间质转化以及微管形成的影响

韩贵良，石 岩，焦 婷，贾友超，任冠颖

肺癌是当前世界上造成癌症相关死亡的重要原因，非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma，NSCLC)为肺癌中的一大类。NSCLC是一种异质性肿瘤，约占全世界所有肺癌病例的85%。当前，手术切除仍是治愈的最有效的选择。尽管如此，在诊断时仍有近70%的患者发展为局部晚期或转移性疾病。因此，有必要寻找新的治疗策略和药物。G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(G-protein coupled receptor-associated sorting protein 1，GASP-1)，主要在肿瘤上皮和脑肿瘤转化的胶质细胞中表达。研究发现脑癌、肝癌、乳腺癌和肺癌患者血清中GASP-1的表达比正常健康人的多4～7倍。类似研究将GASP-1鉴定为潜在的几种癌症血清和肿瘤生物标志物，并推测GASP-1可能是癌症治疗药物开发的新靶标。但是GASP-1在肺癌中的研究鲜有报道。该文研究了GASP-1基因干扰对NSCLC细胞侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)以及微管形成的影响，希望能为NSCLC的治疗提供新策略。

1 材料与方法

1.1 材料

肺癌A549细胞购自中国科学院的细胞库，并用含10%胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM)于37 ℃进行培养生长。将sh-RNA及其相应的阴性对照克隆到pGPU6 / Neo质粒(上海GenePharma公司)中以靶向GASP-1。将前期筛选的GASP-1-shRNA1用于后续试验。GASP-1抗体购自美国Abcam公司；TRIzol、RT-PCR试剂盒及SYBRGreen RT-PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；RPMI-1640培养基购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自美国Gibco公司；E-cadherin、N-cadherin、vimentin和GAPDH抗体及二抗来自美国CST 公司。

1.2 方法

1.2.1

慢病毒感染 肺癌细胞以5×10个/孔接种6孔板，置培养箱内培养至融合度为40%时，以MOI=20分别添加慢病毒，再加入适量的polybrene (终浓度为5 mg/L)；12 h后添加新鲜培养液；培养72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况，以1 mg/L的嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞系。……