长链非编码RNA PVT1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

李 力，郭祥翠，王倩青，李 君，郜智慧

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌。在诊断时，大多数患者已经处于疾病的中晚期，近几年来，年轻患者的发病率逐年上升。因此，研究肿瘤的发生发展过程，寻找新的治疗靶点，已成为宫颈癌研究的重点。近年来，随着治疗手段的进步，提高了患者的生存率和生活质量。然而，肿瘤复发和转移仍然是宫颈癌患者死亡的主要原因。

生物信息学分析已确定浆细胞瘤变异易位1基因(plasmacytoma variant translocation 1, PVT1)是胃癌、肺癌、胰腺癌和宫颈癌等多种癌症类型中少数关键功能性lncRNA之一。PVT1对宫颈癌的发生发展具有调节作用，但是，潜在的机制尚未完全清楚。miR-484位于chr6上，最初被发现与癌症对化疗药物的耐药性有关。有研究表明miR-484在肝细胞癌的癌前病变中过表达，并且可以在促进肝细胞的转化和肝癌的发展。因此，该研究通过探究长链非编码RNA PVT1与miR-484靶向关系对宫颈癌细胞的影响，以期对宫颈癌的治疗和预后提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

PVT1 shRNA (sh-PVT1)(上海生工生物公司设计合成)；miR-484 inhibitor、Matrigel基质胶、Lipfectamine 3000转染试剂盒(美国Invitrogen公司)；顺铂、胎牛血清、0.25%胰酶和DMEM细胞培养液、RIPA裂解液(美国Sigma公司)；BCA试剂(上海碧云天生物科技公司)；TRIzol试剂盒、反转录试剂盒和荧光定量试剂盒(美国ThermoFisher公司)；Transwell小室及人工基底膜(美国BD公司)；Ki-67、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、、E-cadherin和N-cadherin抗体(美国NEB公司)；HRP标记的山羊抗小鼠二抗(美国Santa Cruz公司)；Invitrogen E-Gel Imager凝胶成像仪(美国赛默飞公司)；Olympus CK30显微镜(日本奥林巴斯光学有限公司)。……