Lnczc3h7a对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

任鹏涛，郝英豪，阮红训，秦晓宁，张 苑，黄 炜

结直肠癌是临床常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率较高，患者5年生存率较低。结直肠癌的发生发展受多种基因及蛋白的调控，研究相关分子的生物学作用对解析结直肠癌的发病机制意义重大。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可对多种疾病的生理、病理过程产生影响。Lnczc3h7a是近年来新发现的lncRNA家族成员，其参与某些肿瘤的发生和发展，但作用机制目前还鲜有报道。胶原三股螺旋重复蛋白6(collagen triple helix repeat protein 6，CTHRC6)是一种分泌性糖蛋白，具有促进细胞迁移和减少胶原沉积的功能。研究显示CTHRC6在结直肠癌、食管癌等实体瘤中异常表达，可能与肿瘤的侵袭、迁移有关。该研究拟分析Lnczc3h7a在结直肠癌细胞中的表达及其对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

6种结直肠癌细胞株(SW620、SW480、HCT116、DLD-1、Caco-2、HT-29)及正常结直肠上皮细胞系(FHC)均购自北京中国医学科学院基础医学研究所；鼠抗人CTHRC6抗体及GAPDH抗体购自美国Santa Cruz公司；Lnczc3h7a模拟物(Lnczc3h7a mimics)和Lnczc3h7a抑制物(Lnczc3h7a inhibitor)购自广州锐博生物有限公司；脂质体Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；RNA提取试剂盒、RT-PCR反转录试剂盒及荧光定量试剂盒购自日本Takara公司；荧光定量PCR仪7500购自美国ABI公司；酶标仪PerkinElmer购自美国Enspire公司。

1.2 方法

1.2.1

RT-PCR法检测Lnczc3h7a在结直肠癌细胞中的表达 按照RNA提取试剂盒说明书的操作步骤，提取6种结直肠癌细胞株和正常结直肠上皮细胞中的总RNA。按照RT-PCR反转录试剂盒说明书合成cDNA。按照荧光定量试剂盒说明书，使用ABI 7500 PCR仪进行RT-PCR反应。采用2方法计算Lnczc3h7a的表达水平，以GAPDH为内参。……