CLIC4对胃癌细胞SGC-7901增殖与迁移的影响

李 瑶，冯 成，程晓敏，李 超，耿慧武，刘晓颖，王 华

中国是胃癌发病率和病死率较高的国家之一，亟需更有效的生物标志物或药物靶标。CLIC4作为胞内氯离子通道(chloride intracellular channel, CLICs)蛋白家族成员之一，在某些肿瘤类型和基质细胞中异常高表达，且其定位和功能的改变，在肿瘤发生发展中发挥重要作用。有研究表明，子宫平滑肌瘤、神经胶质瘤和黑色素瘤等肿瘤形成过程中CLIC4的表达显著上调；而人原发性肺癌和肺癌细胞系中CLIC4的表达减少，表明其抑制肺癌细胞生长；siRNA介导的CLIC4下调促进小鼠肝癌Hca-F和Hca-P细胞的凋亡。目前CLIC4对胃癌作用的研究鲜有报道，该研究从胃癌细胞系SGC-7901着手，研究CLIC4对细胞增殖与迁移的影响，为进一步探索CLIC4在胃癌恶性进展中的作用提供重要线索。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

1.1.1

主要试剂 胎牛血清购于以色列Biological Industries公司；RPMI-1640和Opti-MEM培养基购于美国GE公司；胰酶细胞消化液、青霉素-链霉素混合液、Western细胞裂解液、苯甲基磺酰氟(PMSF)、Western一抗稀释液购于上海碧云天生物技术有限公司；Lipofectamine RNAi MAX试剂购于美国Thermo-Fisher公司；PVDF膜购于加拿大Bio Basic公司；β-actin、CLIC4、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin抗体购于武汉Proteintech公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记兔抗山羊IgG、DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.1.2

主要仪器 CO恒温培养箱(VIOS 160i，美国 Thermo-Fischer公司)；BSC-2级生物安全柜(1300，美国Thermo-Fischer公司)；倒置光学显微镜(TS-100，日本株式会社尼康)；高速冷冻离心机(Microfuge 20R，美国Beckman Coulter公司)；恒压电泳仪(PowerPacBasic，美国BIO-RAD公司)。

1.1.3

shRNA和siRNA CLIC4 shRNA、siRNA和阴性对照shRNA、siRNA合成于上海吉玛生物科技有限公司，序列为见表1、2。

表1 shRNA序列

表2 siRNA序列