猪圆环病毒1型LAMP检测方法的建立及初步应用

田瑶，李佳昕，杨莹，王硕，时建立，彭喆，李琛，徐绍建，吴晓燕，刘畅，韩红，李俊，3

（1.青岛农业大学动物医学院，山东 青岛 266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东 济南 250100；3.山东师范大学生命科学院，山东 济南 250014）

猪圆环病毒（PCV）最初被认为是猪肾连续细胞系中的一种类似于微小病毒的病毒污染剂。随后，Allan等［1］证实该病毒来源于制备PK-15细胞的猪肾组织，是一种无包膜、小（17 nm）病毒，含有单链环状DNA基因组。在群体水平上，PCV1的血清流行率在10%到100%之间［2］。虽然PCV1对猪没有明显的致病性，但是PCV1和PCV2具有76%以上的核苷酸同源性，并且两种病毒在猪群中临床感染率均比较高，存在共同感染的现象，所以不能忽视PCV1的潜在致病性［3］。据报道，体外感染PCV1能够对猪肺泡巨噬细胞功能产生短暂影响［4］。经PCV1感染后部分仔猪的肺脏、肠道与淋巴器官等组织中能够检测出相应的抗原［5］。因此，目前仍难以排除PCV1对猪免疫系统的潜在损害作用。

LAMP是在2000年由日本的Notomi等［6］发明的一种能够在恒温条件下快速扩增核酸片段的技术。特异性核苷酸延伸是通过具有链置换活性的DNA聚合酶和两对内外引物实现的。保持恒定温度60～65℃在30～60 min内即可完成反应［7，8］。与其他方法相比，LAMP具有快速、特异、经济等优点［7-11］。SYBR GreenⅠ是一种可以结合在双链DNA双螺旋小沟区域的染料，游离状态时SYBR GreenⅠ可发出微弱荧光，肉眼观察呈橙色；与双链DNA结合后，荧光增强，紫外分析仪下呈绿色［12］。因此，SYBR GreenⅠ也被用于LAMP产物的检测［13］。

猪圆环病毒之间及其与猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒之间存在共感染现象。……