亚热带地区蚕种低温冷藏保护免浸酸技术研究

莫云霞，韦红群，李燕飞，何珊珊，余武昌，何松涛，苏林，蒋玉莲，黄艺

（广西壮族自治区蚕业技术推广站，南宁市 530007）

广西地处我国南部沿海，北回归线横贯中部，气候温暖，热量丰富，雨水丰沛，属中、南亚热带季风气候区［1］。春季气温回升快，桑树发芽早，夏季时间长、气温较高、降水多，冬季时间短，一年内可以多批次养蚕。广西早在东汉时期即开始种桑养蚕［2］，20世纪70年代以前主要饲养多化性蚕品种，70年代以后，通过引种和育种进行品种更新，广西开始饲养含多化性血统的二化性家蚕品种，直到现在，广西推广饲养的蚕种是以抗性见长的含多化性血统的二化性家蚕品种。广东和广西的气候以及饲养的家蚕品种抗性相近，长期以来形成两广独特的滞育蚕种冷藏保护人工活化处理技术方式。蚕种冷藏保护是蚕种生产的一个重要环节［3］，蚕种冷藏保护技术处理影响到蚕种质量、孵化情况和继代的饲养成绩。两广地区滞育蚕种采用冷藏浸酸活化法处理。冷藏浸酸活化法处理蚕种具有孵化率高、发育整齐的优点，但在浸酸处理过程中技术处理不当，如浸酸刺激不足，会造成蚕种解除滞育不充分，孵化不齐；浸酸刺激过量易导致死卵增加，蚁蚕体质弱，发育不齐，严重的还会造成技术事故。两广地区生产上习惯使用平附种，平附种蚕种浸酸处理前需要经过2%的甲醛溶液浸泡以固定蚕卵。甲醛是公认的一种强致癌物质，对人体健康有负面影响［4］。蚕种浸酸用的盐酸是强无机酸，具强腐蚀性、强刺激性，对动植物组织有腐蚀性，对人类呼吸系统、眼睛、皮肤和肠道黏膜有损伤作用。同时由于甲醛和盐酸的强刺激性和强腐蚀性对生产周边环境有极强的破坏性，长期直接排放含有这些物质的废水会污染周围环境和水体，也会影响排污设施的安全，与我国提出的产业可持续发展要绿色环保的理念相违背，因此滞育蚕种人工活化处理有必要向免浸酸处理方向发展。

以江浙为代表的蚕区饲养二化性蚕品种，其越年蚕种采用春制春用，通过复式冷藏进行胚子活化处理，蚕种经复式冷藏处理后可直接出库催青孵化养蚕，技术处理过程环保。复式冷藏处理蚕种保护和冷藏周期长且经过0～2.5 ℃低温冷藏。两广地区含多化血统的蚕品种耐低温冷藏能力较弱，不能完全套用江浙的复式冷藏方法。近年来，业界对两广地区在蚕种的免浸酸处理技术方面有一定研究。张学武等［5］以广东推广品种为对象研究秋制春用的复式冷藏的免浸酸技术取得成功。广西地区主要是对延期冷藏技术处理方面的探索研究。莫云霞等［6］对推迟932、7532 原原种用种时间研究后认为，冷藏时间在140 d以上的，蚕种出库前经过适当的中库调整3 d后再出库，不需要经过浸酸处理，蚕种孵化率就可以达到生产要求。毛洪斌等［7］提出杂交原种滞育种冷藏达130 d以上不需要浸酸，可直接进行卵面消毒后催青。李国栋［8］提出延期冷藏蚕种免浸酸处理优于浸酸处理。目前，蚕种冷藏免浸酸技术系统研究仍较少，在此借鉴江浙地区复式冷藏方式，在冷藏浸酸种冷藏方式的基础上进行家蚕不同滞育程度的免浸酸低温冷藏保护技术研究，从蚕种实用孵化率角度找出适合两广乃至亚热带地区蚕种的免浸酸低温冷藏保护技术参数并应用于生产，使得广西的蚕种冷藏保护人工活化处理更环保安全。

1 试验时间及地点

1.1 试验时间与试验地点

于2018 年9 月—2020 年8 月在广西壮族自治区蚕业技术推广站冷库进行试验研究。

1.2 试验材料及方法

1.2.1 试验材料 试验材料为芙蓉×932、湘晖×7532，由广西壮族自治区蚕业技术推广站原种场生产提供。

从长远来看，我国应尽力去教育和训练专门从事环境会计的职业人才，在大中专学校增添环境会计、审计专业课，为用人单位栽培具有权利和行为能力的工作人员。企业应培养和训练相应的会计人员，使得符合环境会计的要求，使会计人员的思想与行为得到很好的表现，可以设立定期的考核制度，保证企业内部员工的综合表现符合企业的要求，为企业的发展贡献一份力量。增强财会人员与环境技术人员、生产员工等的沟通，彼此了解对方的知识和必要信息，寻找适合的环境会计信息披露计量方法和披露形式。[17]相关环境会计人员理应学习和熟悉相关环境会计专业知识，这样对于环境会计实践工作的顺利开展有很大的益处。

2.1.3 湘晖×7532 的春制秋用种孵化成绩 湘晖×7532的春制秋用种孵化成绩见表3。

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图1 蚕种保护与冷藏处理流程图

入库前保护：春制秋用种入库前保护是蚕蛾产卵后的蚕种在温度25.0～25.5 ℃，湿度80%～85%下分别保护3 d、4 d、5 d、6 d、7 d；秋制春用原种入库前保护蚕蛾产卵后的蚕种分别在温度24 ℃（产卵后1～20 d）以及22 ℃（产卵后20～30 d），湿度80%～85%下保护10 d、15 d、20 d、25 d、30 d。

中库保护：蚕种入库冷藏需经中库（13～15 ℃）过渡保护，中库保护时间为：春制秋用种0.5 d，秋制春用种根据库外保护7～10 d、10～20 d、20～30 d 的时长分别过渡3～5 d、5～10 d、10～20 d。第一次冷藏（以下简称一冷）：经中库过渡保护的蚕种进入内库一冷。一冷冷藏时间长短根据不同的库外保护时间设置：库外保护时间为3 d时，一冷时间分别为50 d、60 d、70 d、80 d；库外保护时间为4 d 时，一冷时间分别为60 d、70 d、80 d、90 d；库外保护时间为5 d时，一冷时间分别为70 d、80 d、90 d、100 d；库外保护时间为6～30 d时，一冷时间分别为80 d、90 d、100 d、110 d。

中间感温（以下简称中感）：蚕种经第一次冷藏后再次拿到中库（温度13～15 ℃）进行感温一定时间，让蚕种发育到一定程度后再进行第二次冷藏，其中春制秋用种分别中感3 d、5 d、7 d，秋制春用种分别中感3 d、5 d、7 d、9 d。

第二次冷藏（以下简称二冷）：经过中感的蚕种再次进入内库进行冷藏。二冷时间分别为0 d、10 d、20 d、30 d、40 d、50 d。

1.2.3 判定方法 广西地方标准DB45/T 84—2003《蚕种保护、冷藏、浸酸技术规程》［9］规定产卵后蚕种在24～25 ℃温度中保护2～7 d，经10～15 ℃中间温度过渡保护0.5～2.0 d后，入库冷藏。冷藏温度2.5～5.0 ℃，冷藏时间40～100 d；产卵后蚕种在24～25 ℃温度中保护7 d以上，经10～15 ℃中间温度过渡保护2～20 d后，入库冷藏时间不少于110 d。长期生产实践经验总结出，冷藏浸酸技术处理的蚕种经不同库外保护时间后最适宜冷藏时间分别为：库外保护时间为3 d 冷藏时间为60 d、库外保护时间为4 d 冷藏时间为80 d、库外保护时间为5 d冷藏时间为90 d、库外保护时间为6 d冷藏时间为110 d、库外保护时间达到7 d 或7 d 以上冷藏时间为120 d，蚕种在冷藏时间到期出库浸酸后催青使用。在蚕种免浸酸孵化试验中，蚕种在设定的保护时间处理及相应的冷藏时间内通过免浸酸处理的方式能取得稳定的、达到桑蚕原种的实用孵化率≥92%的国家标准［10］，则认为这种免浸酸处理的方式是可行的。

（4）库外保护6 d、7 d 孵化成绩最低的为保护6 d、第一次冷藏80 d、中感3 d 的蚕种，孵化率为79.37%（2019 年），第一次冷藏后经中感后直接出库的蚕种各不同冷藏时间处理均有孵化成绩不达标的情况。二次冷藏后除保护6 d，第一次冷藏时间80 d中感后需要二次冷藏20 d 以上外，其他处理二次冷藏10 d以上均能取得理想的孵化成绩。从冷藏时间上看，只有两次冷藏时间累计在100 d 以上、且第二次冷藏时间不低于10 d，低温冷藏免浸酸处理的孵化成绩才能稳定的达标。

在当前形势下，旅游地至少应开通门槛较低的微信公众号、微博公共号，以方便游客获取旅游地真实信息，改变以前推广渠道堵塞的状况。

B.利用SPSS进行数据分析。首先仍要将已知的加工整理数据恢复为原始数据，在“态度”变量中可进行如下编码：1—赞同，2—中立，3—反对；在“身份”变量中编码为：1—学生，2—教师，3—领导。之后依次单击菜单栏“分析”→“描述统计”→“交叉表”，在交叉表窗口中，将“态度”变量移入“行”，将“身份”变量移入“列”，如图5所示。接下来单击交叉表窗口中的“统计量”按钮，在弹出的窗口中勾选“Gamma”系数，如图6所示，单击继续。再单击“单元格”按钮，在弹出的窗口中，勾选百分比选项卡中的“行”、“列”、“总计”，如图7所示，单击继续。回到交叉表窗口，最后单击确定。运行结果如图8和图9所示。

2 试验结果与分析

2.1 孵化成绩调查

2.1.1 芙蓉×932 春制秋用种的孵化成绩 芙蓉×932春制秋用种的孵化成绩见表1。

（1）库外保护3 d 第一次冷藏50 d，中感3 d，二次冷藏0 d 的实用孵化率为91.54%（2019 年）和第一次冷藏60 d，中感3 d，二次冷藏0 d，实用孵化率为85.55%（2019 年）低于92%的原种实用孵化率标准，其他处理实用孵化率都达标，第一次冷藏70～80 d的所有处理孵化成绩都达标。孵化率最高的为2019年一次冷藏70 d、中感7 d、二次冷藏时间30 d 的99.75%；由于第一次冷藏60 d，中感3 d，二次冷藏0 d，实用孵化率成绩低于92%的国家原种实用孵化率标准，建议库外保护3 d后两次冷藏时间要长于70 d。

从试验取得稳定孵化率达标成绩来看，库外保护3 d、两次冷藏时间长于70 d；保护4 d，两次冷藏时间长于90 d，这两个冷藏时间均为超常规冷藏浸酸种计划冷藏时间10 d，因此保护3～4 d 后，可根据生产出库实际需求进行不同的技术处理，以冷藏浸酸种计划冷藏时间再延长10 d 为处理技术转换的时间点，若冷藏时间超出这时间点可采用中感调节再进行二次冷藏的免浸酸处理方法。冷藏时间在这个时间点以内的蚕种建议采用冷藏浸酸法活化处理。库外保护5 d、两次冷藏时间的和达到80 d，库外保护6～7 d两次冷藏时间之和达到90 d，这两个时间点均在冷藏浸酸种计划冷藏时间内，通过中感调节与二次冷藏相结合采用冷藏时间达到这个时间后的免浸酸处理方法可以取得理想的孵化成绩。所以，芙蓉×932春制秋用种，库外保护时间达5 d以上，冷藏时间达到80 d以上可以通过免浸酸处理方法人工活化蚕种。

（3）库外保护5～7 d 保护5 d的一冷70 d除了中感3 d 二冷0 d（2019 年）的实用孵化率为85.41%，不达标外，其他处理经中感后第二次冷藏10 d 以上的蚕种实用孵化率达到国家标准，第一次冷藏时间达80 d以上，中感后各处理均在92%以上，即两次冷藏时间的和在80 d 以上，孵化率均能达标。库外保护6 d、7 d一冷80 d，二冷0 d均有一个处理的孵化率成绩（2020 年保护6 d、中感3 d 的为91.88%和保护7 d、中感5 d 的88.67%）未达标，其他处理均达标。库外保护6 d、7 d 后第一次冷藏时间80 d、中感后二次冷藏10 d以上和一冷时间在到90 d以上即两次冷藏时间达90 d以上所有处理均达标。

表1 芙蓉×932春制秋用种不同二冷时间的孵化率调查表

续表1

（2）库外保护4 d 蚕种第一次冷藏时间在60～80 d，二次冷藏时间0 d的实用孵化率基本不达标，最低值为88.15%；第一次冷藏时间60 d 中感后需要二次冷藏20～50 d、第一次冷藏时间在70～80 d中感后需要二次冷藏10～50 d 孵化率才全部达标；第一次冷藏90 d，最低值为95.22%，最高值为99.51%，全部达标。从冷藏时间上看，第一次冷藏时间在60～80 d的蚕种中感后必需经二次冷藏且二次冷藏时间不低于10 d、两次冷藏时间不短于80 d或第一次冷藏90 d以上才能取得稳定且达标的孵化成绩。

2.1.2 芙蓉×932 秋制春用种的孵化成绩 芙蓉×932秋制春用种的孵化成绩见表2。

正如休·廷克(Hugh Tinker)所指出的，新独立的缅甸政府对英国的态度主要由两个元素构成，对英国模式的推崇和对英帝国主义的怀疑。在缅甸领导人的同一篇讲话中，可以经常发现这两个交织在一起的元素。[29]吴努眼中所谓的“最友好的”“最坦诚的”缅英关系，在缅甸人满怀期望的援助诉求被英国冷遇、英帝国主义与国内叛乱藕断丝连之下，自然遭到打击，导致缅甸对英国的信任与期望降低。1953年缅方通知英国，1947年签署的英缅防卫协定在1954年1月4日终止，不再签署新的协定。美国学者卡拉汉(Callahan)认为，这主要是因为军方高层认为英国在支持叛乱的克伦族，没有向缅军提供足够的援助所致。[30]

（1）库外保护10 d 和20 d 蚕种实用孵化率除各自第一次冷藏80 d、中感3 d、二次冷藏0 d 的91.83%（保护10 d、2019 年）和91.64%（保护20 d、2019 年）不达标外，其他处理成绩均达标，最高值为第一次冷藏80 d、中感9 d、二次冷藏时间20 d 的99.64%（保护10 d、2019 年）。两个库外保护时间的第一次冷藏80 d、二次冷藏时间10 d 及第一次冷藏90 d以上的各处理孵化率均达标。

（2）库外前保护15 d 蚕种实用孵化率除第一次冷藏90 d、中感9 d、二次冷藏时间50 d 的90.34%（2020年）不达标外，其他处理成绩均达标，最高值为第一次冷藏80 d、中感5 d、二次冷藏时间30 d 的99.68%（2019 年）。从孵化率不达标处理看，第一次冷藏90 d、中感9 d的处理，二次冷藏30 d以上，随冷藏时间延长孵化率成绩逐步降低。综上可知，中感时间过长、蚕种胚子发育过大耐冷藏能力下降，冷藏时间应当缩短。生产上须把握好中感及二次冷藏入库时机，在丙1胚子入库冷藏。

（3）库外保护25 d 和30 d 两个保护时间的第一次冷藏时间80 d和90 d，中感直接出库催青都有出现不达标处理外，其他处理孵化率成绩均在92%以上；第一次冷藏80 d 和90 d 经中感后二冷10～50 d、第一次冷藏100 d 以上，经中感后二次冷藏，可实现随时出库用种。

续表2

秋制种中感9 d后二次冷藏时间为50 d的蚕种，孵化率成绩均偏低，成绩下降；第一次冷藏时间达100 d以上、二次冷藏30 d后，蚕种孵化率成绩下降趋势明显，甚至有不达标区。如库外保护15 d，第一次冷藏90 d、中感9 d、第二次冷藏50 d的蚕种实用孵化率为90.34%。由此可知，中感时间过长，蚕种发育超过丙2胚子后耐冷藏能力下降，因此生产上应尽量避免中感时间过长、蚕种发育超出丙2胚子再入库冷藏。

1.2.2 试验方法 蚕种保护与冷藏处理方法按照以下流程进行（图1）。

电视画面中的字幕发布了首相的指示：“你们中的许多人都安全地聚集在学校礼堂和社区中心里。我们要求你们待在原地，这样你们能得到处理。假如你们待在家中，请待在原地；我们会找到你。”

（1）库外保护3 d 在试验范围内，中感后直接出库（二冷时间为0 d）的蚕种，第一次冷藏时间不论多长，均有孵化成绩不达标的处理。孵化成绩最低的为第一次冷藏60 d、中感3 d 的蚕种，仅73.72%（2019年）；第一次冷藏50 d和60 d，只有二次冷藏时间达30 d以上，孵化成绩才能全部达标；第一次冷藏70 d和80 d，只有二次冷藏时间分别达20 d和10 d以上，孵化成绩才能全部达标；从冷藏时间上看，只有两次冷藏时间的和在90 d 以上，低温冷藏免浸酸处理的孵化成绩才能稳定，且达标。综上可知，库外保护3 d 入库冷藏的方式在计划用种前不能取得稳定达标的孵化成绩，建议尽量采用冷藏浸酸种处理方式进行人工孵化处理。

（2）库外保护4 d 第一次冷藏时间60～80 d、二冷时间为0 d的孵化成绩基本不达标，最低的为第一次冷藏60 d、中感3 d 的蚕种孵化率为51.79%（2019年），第一次冷藏时间90 d孵化成绩均达标；第一次冷藏60 d 中感后只有二次冷藏时间达30 d 以上，孵化成绩才能全部达标，第一次冷藏70 d和80 d中感后只有二次冷藏时间分别达20 d 和10 d 以上，孵化成绩才能全部达标。由此可见，从冷藏时间上看，两次冷藏时间的和在90 d以上，低温冷藏免浸酸处理的蚕种的孵化率才能稳定的达标。

（3）库外保护5 d 第一次冷藏完成经中感后直接出库（二冷时间为0 d）的各不同冷藏时间处理均有孵化成绩不达标的情况，孵化成绩最低的为第一次冷藏70 d、中感5 d 的蚕种，孵化率为65.57%（2019年）。第一次冷藏70 d 中感后二次冷藏时间达20 d以上、第一次冷藏80～100 d中感后二次冷藏时间达10 d以上孵化成绩才能全部达标。在试验范围内，从冷藏时间上看，只有两次冷藏时间的和在90 d以上、且第二次冷藏时间不低于10 d，低温冷藏免浸酸处理的孵化成绩才能稳定的达标。

冷藏方法：蚕种冷藏前40 d 的冷藏温度为4～5 ℃，40 d 后降到3～4 ℃。中间感温温度为13～15 ℃，二冷冷藏温度为3～4 ℃。调查原种实用孵化率和各个中间感温时间蚕卵胚子发育进度。

表3 湘晖×7532春制秋用种不同处理二冷时间的孵化率调查表

续表3

续表3

从取得稳定孵化率达标成绩需要最短冷藏时间看，库外保护3～5 d两次冷藏时间的和必须达到90 d，需要的冷藏时间均超出冷藏浸酸种计划冷藏时间，库外保护5 d以内的蚕种，建议采用冷藏浸酸的人工活化法。库外保护6 d、7 d两次冷藏时间的和必须达到100 d，均在两个保护时间对应的冷藏时间110 d和120 d 以内。所以，湘晖×7532 春制秋用种库外保护时间达到6 d 以上时可以采用免浸酸处理的方式来活化处理蚕种。

2.1.4 湘晖×7532 秋制春用种 湘晖×7532 秋制春用种孵化率见表4。

在库外保护时间短、冷藏时间偏短的情况下，蚕种的孵化成绩偏低、波动较大，说明库外保护时间短蚕种蛾圈间卵龄开差较大，冷藏时间偏短的情况下蚕种解除滞育的程度不一致；随着库外保护时间的延长，孵化成绩波动逐步变小，说明随着库外保护时间的延长，蚕种滞育程度加深，蚕种间卵龄差变小，蚕种发育更整齐。库外保护时间相同的条件下，在一定时间范围内第一次冷藏时间越长，孵化成绩越高、越稳定，说明冷藏时间越长，蚕种滞育解除越充分。生产上应尽量延长库外保护时间和第一次冷藏时间，使蚕种发育整齐、充分解除滞育，确保孵化质量。

由表4可知，库外保护10 d孵化率最低的为第一次冷藏80 d、中感3 d、二冷0 d 的蚕种，孵化率为83.54%（2019年），最高的为第一次冷藏80 d、中感3 d、二冷20 d的蚕种，孵化率为98.99%（2019年）；库外保护15 d 孵化率最低值为80.15%，最高值为98.52%；库外保护20 d 孵化率最低值为82.35%，最高值为98.75%；库外保护25 d孵化率最低值为81.43%，最高值为99.54%；库外保护30 d 的孵化率最低值为81.86%，最高值为99.52%。从全部调查成绩看，秋制春用种所有保护时间、不同一冷时间，经中感后直接出库催青的处理，孵化成绩基本不达标，均需要通过第二次冷藏才能取得稳定达标孵化成绩。其中，库外保护10 d、25 d、30 d，第一次冷藏时间范围内，第二次冷藏达到10 d 以上能取得稳定的达标孵化成绩，库外保护15 d、20 d，第一次冷藏时间80 d、中感后二次冷藏时间需要达到20 d，第一次冷藏时间90～110 d、中感后二次冷藏时间需要达到10 d，能取得稳定的达标孵化成绩。从安全用种的角度考虑，秋制春用种试验范围内两次冷藏时间应在100 d以上，且二次冷藏时间不少于10 d。综上可知，在计划用种前通过免浸酸处理的方法可以取得理想的孵化成绩，所以湘晖×7532 秋制春用种可以采用免浸酸的方式来处理蚕种。

续表4

续表4

蚕种中感后二次冷藏10 d的孵化成绩与冷藏0 d相比有明显提高，说明蚕种中感后再冷藏处理有助于滞育解除，促进胚子发育。生产上，在明确用种时间情况下，应避免冷藏中感后直接出库；在保证第一次冷藏时间的基础上，中感后，应尽可能保证二次冷藏时间达到10 d。

选择2017年4月—2018年4月在本院就诊的膝关节置换术患者330例作为研究对象。根据护理方式的不同，将其分为两组，对照组和观察组。对照组患者中，男82例，女83例，年龄为57～78岁，平均年龄为（72.2±4.6）岁，病程为3～12年，平均病程为（6.3±1.3）；观察组组患者中，男85例，女80例，年龄为59～83岁，平均年龄为（73.2±5.1）岁，病程为2～11年，平均病程为（6.4±1.4）年。两组患者在一般临床资料比较，差异不具有统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

两个品种在秋制春用种试验中，中感9 d处理二次冷藏时间达30 d 后，孵化率成绩随二冷时间增加呈下降趋势，且随着第一次冷藏时间的增加下降趋势越明显，说明随着冷藏时间增加，蚕种逐步发育、中感时间过长，胚子发育偏大，二次冷藏时蚕种耐冷藏能力下降。生产上应根据蚕种第一次冷藏时间及蚕种发育进度，控制中感时间，防止胚子发育超过丙2再进行二次冷藏。

2.2 蚕卵胚子发育调查

蚕卵胚子各个发育阶段耐低温冷藏能力不同，甲胚子到丙胚子期蚕种耐低温冷藏能力强，丁胚子后特别是戊胚子后进入胚子器官分化期，蚕种不耐冷藏，生产上以丙2胚子为催青加温的起点胚子［11］。

6、特别注意抓好幼苗期虫害防治（播种的当天，5厘地的苗床用50g敌百虫加少量水溶解后，拌玉米粉2-2.5公斤撒于苗床上及四周防蟋蟀，施药后遇雨要重新施药，或用旧塑膜在苗床四周建1米高的围栏防虫，效果较用药更好）。

中感是蚕种胚子发育调整的过程，生产上利用丙胚子耐冷藏能力强的特点，通过中间感温来调节蚕种发育，胚子发育到丙1进行第二次冷藏，可以有效地延长二次冷藏时间同时利于生产上出库催青、收议计划的制定。可以把蚕种中感发育到丙1胚子时间作为免浸酸处理的中感时间参数。试验中，通过中感胚子发育调查情况看，湘晖×7532胚子发育阶段与芙蓉×932基本相同，但在进度上稍慢，具体调查情况见表5。

还有一些地方办理合作社是为了拿到政府补助。一位火龙果种植合作社老板坦言，他为了拿到政府对发展现代农业基础设施的支持，成立了合作社，招几个贫困户，“装点门面”。

表5 蚕种不同处理中感时间胚子发育调查表

从发育调查表可以看出，相同库外保护时间、中感时间，胚子发育随着冷藏时间增加而增大。相同冷藏时间及中感时间条件下，库外保护时间越长，滞育程度越深，胚子发育越慢，库外保护时间越长，胚子发育差距越小。第一次冷藏时间越长，胚子中感发育到丙1胚子需要的时间越短。以发育到丙1胚子所需要的中感时间为二次冷藏入库时间点，结合孵化率调查成绩可以得出两个原种在试验范围内不同保护时间、第一次冷藏后进行中感的时间参数如下。

很轻声的一句话，他当时并没有在意，然而此刻，这句话好似随着刚才的梦境，一同在心中苏醒了。它带着一种魔力，让他心中对飞翔的渴望，尤其强烈。

芙蓉×932的春制秋用种在库外保护时间为3 d，冷藏时间70～80 d时，中感时间为3 d；当库外保护时间为4 d，冷藏时间90 d时，中感时间为3 d；当库外保护时间为5 d 时，一冷70 d时，中感时间为5～7 d，一冷80 d时，中感时间为5 d，一冷90～100 d时，中感时间为3 d；当库外保护时间为6～7 d，一冷80～90 d时，中感时间为5～7 d，一冷100 d时，中感时间为5 d，一冷110 d时，中感时间为3 d。

芙蓉×932的秋制春用种在库外保护时间在试验范围内，当一冷80 d 时，中感时间为5～7 d，当一冷90 d 时，中感时间为3～5 d，当一冷100～110 d 时中感时间为3 d。

湘晖×7532的春制秋用种当库外保护时间为6～7 d，一冷80～90 d时，中感时间为5～7 d，一冷100～110 d中感时间为3～5 d。

为了解高中英语阅读教学及学生阅读能力的现状，本课题组针对江苏地区设计了《英语阅读现状调查问卷》，在线上、线下对284名在读高中生进行了调查，取得了真实可靠的数据，并对调查结果进行了分析。

湘晖×7532 的秋制春用种的库外保护时间在试验范围内，当一冷80～90 d 时中感时间为5～7 d，当一冷100～110 d时中感时间为3～5 d。

2.3 低温冷藏保护免浸酸处理技术参数

从实用孵化率调查成绩和胚子发育调查相结合，可以得出芙蓉×932 在库外保护时间5 d、湘晖×7532 在库外保护时间6 d 以上条件下的低温冷藏保护免浸酸处理方法的参考技术参数。具体参考技术参数如表6 所示。生产上可以根据计划用种时间倒推蚕种保护时间和冷藏时间，以使蚕种可以在预定的时间内通过低温冷藏保护免浸酸解除滞育，从而使蚕种保护更加符合实际的用种需求。

表6 免浸酸低温冷藏保护参考技术参数表

续表6

3 小结

本试验以芙蓉×932和湘晖×7532为研究对象，以实用孵化率为主要考核指标，进行亚热带地区蚕种低温冷藏保护免浸酸技术研究。库外保护时间少于5 d 的芙蓉×932 蚕种和库外保护时间少于6 d 的湘晖×7532 蚕种，由于从制种到用种时间间隔短、库外保护时间短、冷藏时间短，在冷藏浸酸种相应的用种计划时间范围内，免浸酸处理的实用孵化率偏低、且不稳定，因此，从安全用种的角度，建议采用冷藏浸酸活化法。如在库外保护时间够长、采用低温冷藏保护免浸酸处理、实用孵化率达到国家原种标准的蚕种，可以通过低温冷藏保护免浸酸处理的方法来进行蚕种的人工活化处理。生产上可尽量延长第一次冷藏时间，缩短中感时间，确保蚕种在丙2胚子前入库进行二次冷藏，可有效地延长供种时间。由于本次试验只调查芙蓉×932和湘晖×7532，本区域内同品系的蚕品种可参照执行。试验主要对实用孵化率进行调查，下一步仍需对蚁蚕生命力、强健性、饲养成绩进行跟踪调查，才能进一步确认低温冷藏保护免浸酸处理的冷藏范围，特别是二次冷藏的时间参数指标。