基于CRISPR技术的新型冠状病毒检测方法与临床转化进展

张万存，徐新秀，刘康博，张 飞，于志丹，李利锋，张耀东，秦 红，王焕民，张现伟

(1.郑州大学附属儿童医院，河南省儿童医院，郑州儿童医院，a.儿童肿瘤外科，郑州市儿童恶性肿瘤精准诊疗重点实验室，b. 河南省儿童遗传代谢性疾病重点实验室，中国 郑州 450018;2.青岛市市立医院神经内一科，中国 青岛 266011;3.河南省医疗器械检验所生物检测室，中国 郑州 450000)

冠状病毒(Coronavirus, CoVs)为正链单链RNA病毒，基因组分子量约为30 000，是基因组较大的RNA病毒。冠状病毒属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)，可划分为4个(α，β，γ和δ)冠状病毒属[1,2]。除目前肆虐全球的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)外，已知对人类具有致病性的冠状病毒有6种，分别为HCoV-OC43，HCoV-NL63，HCoVHKU1，HCoV-229E，SARS-CoV和MERS-CoV[3-6]，其中SARS-CoV与MERS-CoV具有高传播性和致病性。截至2020年12月24日，根据世界卫生组织提供的数据，全球现存确诊感染人数约21 943 537例，死亡人数约1 733 050例。目前，我国因SARS-CoV-2感染引起的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)得到了良好的控制，但是从全球范围看COVID-19疫情仍未有缓解趋势。因为SARS-CoV-2传播能力强，一旦发现1例COVID-19患者，须对该患者接触人员进行SARS-CoV-2核酸检测，会在短时间内需要大量的检测试剂。因此，目前临床上尤其在一些经济不发达的偏远地区，迫切需求一种可以快速、灵敏、特异性好的SARS-CoV-2现场检测方法。

目前，核酸定性检测作为COVID-19确诊的标准方法，已广泛应用于COVID-19临床确诊工作中[7]。高通量测序技术(NGS)和逆转录实时荧光定量PCR(RT-PCR)是两种常用的SARS-CoV-2分子诊断方法[8-11]。mNGS最初用于SARS-CoV-2核酸序列的鉴定及其溯源分析，被认为是最重要的检测方法之一。然而，由于其成本高、检测时间长等原因，限制了其大规模的临床应用，不适合用于大规模筛查COVID-19[11，12]。……