测定血液病患者血浆Venetoclax浓度的HPLC-MS/MS方法

王磊 代玉超 李梦 刘红星，，4★

Venetoclax 是一种BCL-2 通路抑制剂，用于慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma，CLL/SLL）和急性髓性白血病（acute myeloid leukemia，AML）患者的抗肿瘤治疗［1］。体外研究表明Venetoclax 主要由CYP3A4 代谢，与酮康唑、泊沙康唑和利福平等有较强的药物相互作用，个体间血药浓度差异较大［2-3］。通过检测患者Venetoclax 血药浓度，并个体化地调整给药剂量，可减少不良反应和保障临床疗效［4-5］。本研究拟建立一种液相色谱串联质谱（high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）法测定血液病患者血浆Venetoclax 浓度的方案，并应用于临床治疗药物监测，为Venetoclax 的个体化用药剂量调整提供可靠依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 分析仪器

岛津NexeraXp 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），API3200 MD 三重四级杆质谱仪（美国AB SCIEX 公司），质谱仪采用电喷雾（ESI）离子源，分析软件为Analyst®MD 1.6.3。

1.1.2 试剂

标准品：Venetoclax（批号：1-NWY-41-1，TORONTO RESEARCH CHEMICALS INC，加拿大）；内标：Venetoclax-d8（批号：02-Jun-17-01，Clearsynth，印度）。甲醇（HPLC-Grade，fisher，美国），乙腈（HPLCGrade，fisher，美国），DMSO（二甲基亚砜，Lot：WXBC1590V，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司），甲酸（HPLC Grade，北京迈瑞达科技有限公司）；乙酸铵（HPLC Grade，北京迈瑞达科技有限公司）。

1.1.3 基质及临床样本

空白血浆基质为新鲜小牛血清（北京百奥莱博科技有限公司）。收集本院7 名服用Venetoclax的CLL 患者的血液样本，均为300 mg qd 服药，于服药6 h 时抽血检测峰浓度。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

采用月旭Ultimate@XB-C18液相色谱柱（4.6×50 mm，5μm），柱温60℃；流速：0.7 mL·min-1；液相流动相为：A 相为含2 mmol·L-1乙酸铵+0.1%甲酸的水溶液；B 相为含0.1%甲酸的甲醇溶液。样本进样量为3 μL。洗脱方式为梯度洗脱，B 相浓度从（0.01～1.0）min 由60%～95%，从（1.0～2.5）min 维持95%浓度，从（2.5～2.6）min，B 相浓度由95%～60%，维持60%浓度到3.5 min 结束。

1.2.2 质谱条件

选用电喷雾离子源（ESI+），以多离子反应监测方式（MRM）进行检测。其离子源参数为离子喷射电压：4 500 V，离子源温度：550℃，喷雾气：50 psi，辅助加热气：55 psi，气帘气：20 psi，碰撞气：Medium。……