石蜡包埋组织结核分枝杆菌检测方法的对比分析

张继伟，李钦丽，聂 秀

结核病是由结核分枝杆菌引起的极具危害性的肉芽肿性病变，以肺结核最为常见。目前，组织病理学检查已成为结核病诊断的重要手段。抗酸染色作为结核病主要辅助检查手段，其灵敏度、特异性均较低[1-2]。《中国结核病病理学诊断专家共识》提出结核病的病理诊断标准：根据结核病的病理变化及结核分枝杆菌基因检测阳性才能作出明确诊断。文献报道qRT-PCR法通过特异性扩增结核分枝杆菌的DNA，现已成为结核病的检测手段[3-4]。然而，其在石蜡包埋组织结核分枝杆菌检测中的应用较少，且各实验室报道的阳性率差异较大[5-6]。本实验采用qRT-PCR法进行结核分枝杆菌检测，同时与传统的抗酸染色进行比较，结果显示qRT-PCR优于抗酸染色检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集2018年5月～2019年11月华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科经病理拟诊为结核病或符合结核的石蜡包埋组织1 218例，包括手术标本683例和活检标本535例，其中男性716例，女性502例；年龄2个月～83岁，中位年龄50岁。病变组织种类详见表1，其他包括乳腺、子宫腔、腕部、腹腔、胸壁肿物等组织标本159例。

1.2 主要仪器和试剂Mx3000P型荧光定量PCR仪(美国安捷伦公司)，石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒(QIAGEN公司，德国)，结核分枝杆菌核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(湖南圣湘生物公司)，抗酸染色液(珠海贝索生物公司)。

表1 病变组织种类及抗酸染色和qRT-PCR法检测

1.3 qRT-PCR检测石蜡包埋组织5 μm厚连续切片，手术标本5片，活检标本10片，置于1.5 mL EP管中，按照石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒的操作说明书进行样本DNA提取。……