抵挡丸加味鸡血藤通过PI3K/AKT信号通路抑制结直肠癌上皮间充质转化

薛雾松，刘仍海

结直肠癌(colorectal cancer， CRC)是成人最常见的恶性肿瘤之一，在全球癌症相关死亡主要原因中排名第三位[1]。约1/3的CRC患者确诊时已处于进展期，失去了最佳手术时机[2]。肝转移是导致CRC患者死亡的最主要因素[3-4]。因此探索CRC发展和肝转移的分子机制，将有助于发现用于开发早期诊断和有效治疗靶点的生物标志物[5]。

现代中医理论认为，湿热邪毒是肿瘤发生、发展的重要原因之一。结肠癌的发生是由于机体正气不足，脾失健运，气机不畅，邪毒侵入，湿热蕴结，局部气血运行不畅，湿毒瘀凝下注于肠，滞留积聚所致。《伤寒论》中记载，抵挡丸加味鸡血藤可起到“祛瘀通络，活血攻毒”的疗效。已有研究表明，鱼藤酮能够显著抑制CRC细胞在裸鼠体内的生长，其通过阻断PI3K/AKT信号通路活性抑制Lovo和SW480结肠癌细胞在体内外的增殖和转移能力，诱导其凋亡[6]。抵挡丸加味鸡血藤提取物中含有鱼藤酮，本研究拟探讨抵挡丸加味鸡血藤对CRC发病和转移的疗效和机制，为其治疗提供新的分子靶点；深化中医药预防和治疗CRC发病及肝转移的机制，为临床治疗提供新药和指导法则。

1 材料与方法

1.1实验动物和细胞 ①实验动物：7～8周龄SPF级雌性裸鼠18只(北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证号：JDF-IRB-2020003801)。小鼠饲养环境温度为(22±2)℃，湿度55%±15%，12 h明暗光照循环。小鼠自由进食。②实验细胞：SW620细胞购自ATCC，培养条件为加有10%胎牛血清(FBS)的Leibovitz's L-15培养基，37℃、5% CO2培养箱中传代培养。

1.2实验材料 FBS和Leibovitz's L-15培养基购自Gibco公司；CCK8检测试剂盒、凋亡检测试剂盒、RIPA裂解缓冲液、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量检测试剂盒、原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡试剂盒，均购自Beyotime Biotechnology；……