CXCR4靶向PI3K-Akt信号通路抑制小细胞肺癌血管生成

刘丽丽，吕立丽，谷 雪

小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)是起源于支气管黏膜或腺体的一种高度恶性的疾病，占肺癌病例的10%～15%[1]；该病有进展迅速和广泛转移的特征。虽然多达80%的SCLC患者对一线化疗有反应，但大多数最终会复发，预后很差。SCLC患者的5年生存率仅为1%～2%，因此迫切需要新的疗法改善患者状况[2]。

血管生成对肿瘤的生长至关重要[3]，血管内皮生长因子(vascular endothelial groxth factor, VEGF是肿瘤血管生成的关键因素[4]。多项SCLC基因组分析数据表明，PI3K/Akt信号通路显著改变[5-7]。最近证据显示，PI3K/Akt可以通过不依赖HIF-1的机制上调VEGF表达[8-9]。提示PI3K/Akt是SCLC潜在的治疗靶标。CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4, CXCR4)在趋化性和归巢中起重要作用，这是癌症转移的关键步骤。多项研究证据表明CXCR4与血管生成有关[10-11]，它可诱导Akt磷酸化，导致VEGF在mRNA和蛋白水平上表达上调，促进血管生成[12]。因此，本研究拟探究在SCLC中CXCR4是否可通过PI3K/Akt通路干扰VEGF表达抑制肿瘤血管的形成，为其治疗提供新策略。

1 材料与方法

1.1实验动物 选取7～8周龄SPF级雌性裸鼠18只，购自维通利华(北京)实验动物技术有限公司，环境温度为(22±2)℃，湿度(55±15)%，明暗光照循环12 h。小鼠自由进食。

1.2材料 β-actin抗体(ab8226，Abcam)、Akt抗体(ab18785，Abcam)、p-Akt(ab38449，Abcam)、VEGF抗体(ab32152，Abcam)、PI3K抑制剂LY294002(HY-10108,MCE)；PI3K激活剂YS-49(HY-15477，MCE)；CXCR4拮抗剂AMD3100 (ab120718，Abcam)、CXCR4激动剂NUCC-390(HY-111793，MCE)、CD31抗体(ab28364，Abcam)、Matrigel(354234，BD)。

1.3方法

1.3.1人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)复苏与传代培养：按照Piao等[13]的方法从脐带静脉分离和培养HUVEC细胞。

1.3.2免疫蛋白印迹：SCLC细胞系NCI-H446铺于6孔板中，1×106个/孔，分别给予PI3K激活剂YS-49(30 μmmol/L)和PI3K抑制剂LY294002(30 μmmol/L)处理24 h后，经免疫蛋白印迹法检测Akt、p-Akt和VEGF表达水平。免疫蛋白印迹检测步骤如下：经RIPA裂解提取总蛋白，经变性处理，10%分离胶进行SDS-PAGE电泳。将目的蛋白转至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭1 h；……