红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果比较

唐炳娣，叶志达

（惠州市第三人民医院，广东 惠州 516000）

0 引言

随着输血事业迅速发展，输血安全日益引起了人们的关注与重视，近十来年，卫生部《临床输血技术规范》逐步推广并实施，各级医院也相继开展凝聚胺法配血、RHD 定型并且对有妊娠史、输血史或者短期内需反复输血者进行抗体筛查等工作，旨在减少输血事故，保证输血安全性与有效性[1]。近些年，微柱凝胶法得到推广及应用，其从根本上解决了传统方法操作繁琐等问题。本项目为了比较红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果，以12816 例患者为对象进行观察，分别采取微柱凝胶法与凝聚胺法检测红细胞血型不规则抗体，现在将研究结果总结报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2019 年1 月至2020 年6 月收治的12816 例患者为对象，其中，5978 例男性，6838 例女性，年龄18-74 岁，平均年龄（48.52±4.17）岁。

1.2 方法

本研究中12816 例患者，均分别采用微柱凝胶法与凝聚胺法检测红细胞血型不规则抗体。

1.2.1 仪器及试剂

（1）凝聚胺试剂盒，购自珠海贝索生物技术有限公司；（2）抗人球蛋白微柱凝胶检测卡及抗体筛选细胞（由长春博讯生物技术有限责任公司提供）；（3）低离子介质溶液（由江苏力博医药生物技术股份有限公司提供）；（4）专用离心机以及孵育器等(由长春博研科学仪器有限责任公司提供）。

1.2.2 方法

样本处理：采集研究对象乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝静脉血液标本3mL，使用前需要离心处理，保证血浆中没有纤维蛋白凝块干扰。

检测方法：（1）微柱凝胶法。使用前，微柱凝胶卡离心处理，以免因为凝胶界面不整齐，影响反应结果。取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号1%抗筛细胞各50ul，分别添加至微柱孔中，在相应孔中添加50ul 研究对象的血浆，37 摄氏度条件下进行孵育，持续15 分钟，离心处理5 分钟，通过肉眼观察结果，游离在凝胶上面表示结果呈阳性，沉在底部表示结果呈阴性。（2）凝聚胺法。取1 滴（50ul）抗筛细胞以及2 滴（100ul）研究对象血清或者血浆予以混合，快速加入0.6mL 低离子介质（LIM），促使其充分混匀，再加入2 滴（100ul）凝聚胺，均匀混合，按照3400r/分的标准进行离心处理，离心10 秒钟，弃上清液，大约残留0.1mL，轻轻摇动试管，此时应该可以看到凝块，再滴入2滴（100ul）悬浮液，轻轻摇晃试管，迅速（1 分钟内）通过肉眼进行观察。结果判断时，如果凝集散开，抗体筛查结果判定为阴性；如果凝集没有散开，抗体筛查结果呈阳性。

1.3 观察指标

对比观察两种检测方法的阳性结果。

1.4 统计学方法

研究所得数据均录入至Excel 2010 中予以校对，采用SPSS 20.0 软件进行处理。分比（%）表示计数资料，计数资料用卡方（χ2）检验。P评定检验结果，P＞0.05 提示无统计学差异，P＜0.05 提示有统计学差异。

2 结果

微柱凝胶法不规则抗体阳性率与凝聚胺法比较，差异不大，无统计学意义（P＞0.05）。如表1 所示。

表1 两种不同方法红细胞血型不规则抗体检测结果比较[n，%]

其中，微柱凝胶法检出156 例不规则抗体阳性，自身抗体15 例，高球蛋白影响8 例，同种特异抗体133 例。

3 讨论

不规则抗体，也称“意外抗体”，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。人体血型抗体主要由两类，即IgG 与IgM，所知道的ABO 血型系统的抗-A，抗-B 是IgM 型，其它血型系统的抗体都是IgG 型[2]。其中，IgM 型抗体，在盐水介质中能与含相应抗原的红细胞发生肉眼可见的凝结，是一种传统ABO 血型鉴定手段。IgG 型抗体，在盐水介质中只能使相应抗原的红细胞致敏，不会导致红细胞凝结[3]。抗体筛查可检出ABO 意外不规则抗体，而不规则抗体主要是通过输血或者妊娠等免疫刺激所产生的，故而也称“免疫性抗体”，可导致临床溶血性输血反应以及新生儿溶血病[4]。大多数免疫性抗体在产生初期也可同时产生盐水性抗体，之后主要表现为免疫性抗体，但是大部分免疫性抗体也会因为排除免疫原刺激后而逐渐削弱甚至采用一些方法并不能检测出，这无疑增加了输血事故风险系数。面对这种情况，一方面，已经检出免疫性抗体的患者，需做好宣传工作，叮嘱其今后不管是抗体筛查结果如何都应该选择抗原阴性的血液进行使用，以免导致回忆性免疫反应，引起溶血性输血反应；另一方面，交叉配血以及抗体筛查中，即便是微弱凝集也不可放过，采取有效手段，对可疑标本进行实验，以免因为微弱抗体而被漏检[5]。尽管，国内正常人群不规则抗体检出率仅仅只有0.3%-2.0%，但是若是未能及时检测或者是漏检，可能存在生命风险。因此，为临床选择一种既安全且有效、准确、灵敏的不规则抗体筛查方法至关重要，是输血安全的保障。经典抗人球蛋白实验在输血技术以及某些溶血性疾病诊断中具有较高的价值，但是由于该方法操作比较繁琐，致敏时间长，细胞需要洗涤5 次，难以广泛用于临床输血中。

凝聚胺法，原理与抗人球蛋白实验相同，属于一种多价阴离子聚合物在低离子介质中促进红细胞与血清之间抗原抗体反应的方法，大大提高IgG 抗体检出率，操作简单，试剂便宜，在临床配血中的接受程度高。凝聚胺法，基于LIM 下，多聚季氨盐促使红细胞产生非特异性凝集反应，灵敏度高，价格低廉，且快速，可检测出IgG 抗体与IgM 抗体，但存在一定局限性[6]。凝聚胺法对操作的要求较高，必须按照正确流程振摇细胞扣，在规定时间内判定结果。部分凝聚胺阳性结果会随着放置时间的延长会逐渐减弱，甚至消失。凝聚胺法，最大缺点在于对Kell 系统抗体的敏感性较低，因为中国人K 抗原频率并不高，抗-K 非常少，几乎为0，因此，中国人交叉配血实验以及不规则抗体检测可以直接使用[7]。微柱凝胶法，是建立在抗人球蛋白基础上的一种检测方法，具体来说，就是红细胞膜抗原与相应抗体在填充抗人球蛋白的凝胶介质中发生反应，未被致敏的红细胞可通过凝胶而沉在底部，被相应的抗体致敏的红细胞则不会通过凝胶，故而留在上层，判定为阳性，这一方法具有特异性高、灵敏度高的特点[8]。近些年，微柱凝胶法开始用于临床，其原理与抗人球蛋白也相同，最大优点在于操作简单，无需反复洗涤致敏红细胞，结果容易判断观察且可保留，但是，价格昂贵，影响实验的因素比较多，如纤维蛋白、红细胞凝块等因素。本项目中，选择12816 例患者作为对象进行检测，结果显示，微柱凝胶法不规则抗体阳性率为1.21%（156/12816）高于凝聚胺法1.17%（151/12816），但差异无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，微柱凝胶法与凝聚胺法在红细胞血型不规则抗体检测中均存在较高的灵敏度，但两者各有优点与不足，临床上可根据实际情况选择不同的检测方法，必要时可联合使用两种方法进行检测，提高红细胞血型不规则抗体检出率，保证输血安全性与有效性，减少输血事故。