云南省2008-2018年人间狂犬病流行特征及狂犬病病毒基因分析

杨卫红，杨鹤飞，冯 云，章域震，潘 虹，王 娟

狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，RABV)引起的一种人兽共患中枢神经系统急性传染病，病死率几乎为100%，带病毒犬仍然是人类狂犬病的主要传染源[1]。我国狂犬病的大流行发生在上世纪80年代，90年代通过犬只的综合管理和人用狂犬病疫苗的应用，狂犬病得到控制，本世纪初开始新一轮的流行，近几年全国各省份均有流行，发病总体呈下降趋势[2]。云南省狂犬病的流行趋势与全国狂犬病流行基本相似，2018年全省16个州(市)中有14个合计发生狂犬病21例，仍处于大范围流行[3]。RABV核蛋白(nucleoprotein，N)基因或糖蛋白(glycoprotein，G)基因的系统进化分析表明，我国的RABV可划分为6个进化群(China-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ)，各省有不同的分布[4-5]。以往研究显示，云南境内流行的RABV进化群可分为YN-A、YN-B、YN-C和YN-D，并依次属于China-Ⅰ、China-Ⅵ、China-Ⅱ和China-Ⅲ[6]，RABV的遗传多样性提示云南省RABV来源的复杂性[7-11]。本研究对近10年人间狂犬病的流行特征、2015-2018年云南省RABV样本N基因和G基因序列测定和系统进化进行分析，以阐明近期云南省狂犬病的流行和基因进化特征。

1 材料与方法

1.1资料收集 狂犬病病例资料源于中国疾病预防控制中心信息系统，运用描述流行病学方法对全省狂犬病的疫情数据进行分析；人口资料来源于云南省各州、市统计局和网络直报系统。

1.2样本 收集2015-2018年云南省各地疾控中心和动物疫控部门送检(云南省地方病防治所的病人)、病犬、可疑犬、病牛、病驴等脑组织标本，经直接免疫荧光法(Direct immunofluorescence assay，DFA)抗原检测阳性的样本，-80 ℃低温保存备用。

1.3RABV核酸检测 用QIAamp viral RNA mini kit(德国QIAGEN公司)提取病毒RNA，用Ready-To-Go You-Prime First-strand beads(Ge Healthcare,USA)反转录合成cDNA。……