1株粘质沙雷氏菌噬菌体的分离和鉴定

肖小平，陈依玲，张仁利

粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)是一种腐生菌，在水和土壤中常见，也经常污染动、植物性食品[1]。粘质沙雷氏菌是一种临床上常见的机会病原菌[2]，医护人员被污染的手被认为是其主要的传播媒介[3-5]。在机体免疫力低下的时候可以引起肺部感染、败血症等疾病[1,6-9]。由于临床上抗生素的滥用和不合理使用，粘质沙雷氏菌对多种抗生素具有耐药，给感染控制和治疗带来挑战[10-11]。除此之外，很多媒介昆虫的幼虫阶段生活在水中，粘质沙雷氏菌在这些昆虫的肠道中也大量存在，促进疾病传播[6,12-14]。噬菌体(Phage)是细菌内寄生生物，在自然界也是分布广泛。噬菌体侵染细菌后可以快速增殖并裂解宿主菌[15]，目前临床上也有用噬菌体用于治疗的尝试[16]。因此分离针对粘质沙雷氏菌的噬菌体对防治粘质沙雷氏菌感染具有潜在的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1主要试剂和仪器 LB营养肉汤(028324，广东环凯微生物科技有限公司)、琼脂(028990，广东环凯微生物科技有限公司)、上层LB培养基(20 g LB营养肉汤加7 g琼脂溶于1L蒸馏水)、下层LB培养基(20 g LB营养肉汤加15 g琼脂溶于1 L蒸馏水)、全温振荡培养箱(Shel lab)、II级A2型生物安全柜(Telstar Bio-II-A)、低温离心机(Eppendorf centrifage 5417R)、单孔水浴锅(JuLBO ED-27)。

1.1.2实验用菌种 粘质沙雷氏菌(Sm01、Baz01、CICC22004、CGMCC1.2818、BNCC107931)、大肠杆菌(TH12641)、金黄色葡萄球菌(780)、绿脓杆菌(Pseudomonassp. SQ-7)均为实验室保存。

1.2噬菌体的分离和培养 取深圳某河边污水，4 000 r/min离心15 min，用0.22 μm的滤膜过滤除菌，将滤液装入无菌培养瓶。取4 mL过滤后的上清，加入200 μL的对数期宿主菌培养液，放置37 ℃，220 r/min培养箱培养3 h，用微孔滤膜过滤得到噬菌体原液。……