沉默miR-216a对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠的保护作用及机制研究

卢帅军 汪 芳 张步荣 王卫华

肝纤维化是一个复杂的病理生理过程，主要病理表现为肝脏中结缔组织异常增生、沉积等，若不及时进行干预，易进展为肝硬化，甚至肝细胞癌[1-2]。目前，临床亟需研发预防和治疗肝纤维化的有效药物，以抑制肝纤维化进展，降低因肝纤维化导致的死亡风险。近年来多项研究指出，肝纤维化的发病机制与第10号染色体缺失性磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)和母亲DPP同源物7(Samd7)有关[3-6]。另有研究表明，miR-216a可靶向心脏成纤维细胞中的PTEN和Samd7，促进成纤维细胞增殖和胶原纤维沉积[7]。基于上述研究，推测miR-216a可靶向PTEN和Samd7参与肝纤维化的发生及发展过程。本文对此展开研究，以期为肝纤维化的预防和治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本实验选取50只SD大鼠，均购自凯斯艾生物科技(苏州)有限公司[生产许可证号：SYXK(苏)2017-0041]。所有大鼠均适应性饲养1周，控制昼夜交替间隔为12 h，期间给予充足的普通饲料和水，室温为25 ℃，湿度为60%。

1.2 试剂与仪器

透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ⅣC)的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒均购自南京道斯夫生物科技有限公司。苏木精-伊红(HE)染色试剂盒、Masson染色试剂盒均购自北京索莱宝公司。DYCZ-24DN型垂直电泳槽、DYY-6C稳流稳压电泳仪均购自北京六一生物科技有限公司。7600型全自动生化分析仪购自日本日立公司。

1.3 肝纤维化大鼠模型制备及干预

采用腹腔注射含四氯化碳(CCl4)的橄榄油溶液方法制备肝纤维化模型大鼠[8]。随机选取10只大鼠作为正常组，其余40只大鼠腹腔注射40%的CCl4溶液，按2 mL/kg的标准给药，每周给药2次，共给药12次。……