人乳牙牙髓干细胞治疗肝硬化小鼠模型的研究

陆观珠 包玉洁 白玉盘 焉雷 许洁

肝移植是治疗终末期肝病的有效方法，但是由于供肝缺乏，治疗费用昂贵，且患者需要终生服用抗免疫排斥药物，临床应用受到限制，因此寻求和探索一种新的肝硬化治疗技术成为临床与转化医学的重要研究热点之一。人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth，SHED)具有易获得，低免疫原性和高分化潜能的优点。本研究通过建立小鼠肝硬化模型及SHED治疗肝硬化模型，检测小鼠肝功能、体重、肝脏湿重以及肝脏组织病理学表现，在动物体内初步验证SHED对延缓或逆转肝硬化/肝纤维化的安全性及有效性。

材料与方法

一、实验材料

BABL/c小鼠，雄性，6周龄，体质量为(16±1)g，SPF级。实验涉及的所有动物处理内容均遵从实验动物实验管理和动物福利相关条例和法规，实验设计经过伦理委员会批准并由其监督支持。

实验用SHED在GMP条件下培养，细胞采用0.9% NaCl溶液进行重悬，由卡替(上海)生物技术有限公司提供。

二、小鼠肝硬化模型及干细胞治疗模型建立

15只小鼠饲养于没有病原菌的环境下，在整个实验过程中有充足的水分和食物。将15只小鼠随机分为A、B、C组，每组5只。肝硬化模型的建立：将A组和B组小鼠腹腔注射10% CCl4(4 μL/g)，2次/周，C组腹腔注射0.9% NaCl溶液(4 μL/g)，2次/周。每2周称量记录小鼠体重1次。在肝硬化模型建立的第4周，A组和C组小鼠予尾静脉注射0.9% NaCl 200 μL，1周1次；同时将1×106SHED悬浮于200 μL 0.9% NaCl溶液中，混匀，经尾静脉注射入B组小鼠，每周注射1次，共4周。在第9周时行乙醚麻醉，各组随机取3只小鼠眼眶取血，离心分离血清，应用小鼠肝功能试剂盒检测肝功能指标。……