牦牛附睾ADAM28基因CDS区的克隆和表达研究

王红梅，杨刘玥玲，吴逸韬，杨献康，郑旭昕，赵旺生

（西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010）

去整合素-金属蛋白酶（Disintegrin and Metallopro teinase 28，ADAM28）基因家族成员具有明显的结构特征，包括前域、金属蛋白酶和崩解素域以及半胱氨酸域。ADAM 蛋白在细胞黏附与迁移、细胞融合、精子发生、神经发生等细胞活动中起着至关重要的作用。哺乳动物附睾是精子获得动力和受精能力的关键部位，附睾管是一个高度有序和分节的器官，每一个片段都代表一个独特的生理分区。每个小室在上皮细胞内都有独特的基因表达谱，导致特定的蛋白质分泌到管腔液中，直接或间接影响精子成熟[1]。

ADAM28 是一种含有催化位点的金属蛋白酶，已有数据表明在小鼠附睾中至少存在2 种ADAM28的剪接形式，其组织印记分析显示ADAM28在小鼠附睾中以交替剪接的形式高表达[2]，提示其可能在精子成熟过程中发挥作用。Miyamae 等[3]在猕猴附睾和小鼠附睾的cDNA 文库中测序，发现ADAM28在猕猴附睾中表达高，在淋巴结、胰腺、卵巢和子宫中表达低；在小鼠附睾高表达，在肺、气管、胃等组织低表达，因此在不同物种中，负责在生理条件下表达ADAM28的细胞类型是不同的。由于ADAM28在附睾的高水平表达及其能够分泌CD200 从而参与免疫抑制[4-5]，推测ADAM28参与了精子的成熟和免疫抑制，但没有直接证据证明这种可能性，因此有必要对ADAM28基因在牦牛附睾不同区域的表达进行研究。本研究利用克隆手段获得ADAM28基因的CDS 区，并对其进行生物信息学分析，通过荧光定量检测其在附睾组织中的表达，以期为探讨高原动物的生殖机制提供基本数据，同时为研究ADAM28基因在牦牛附睾上皮细胞中的功能奠定基础。……