殷均阳,郭 航,刘 宇,李辑伦,郭海周
(郑州大学第一附属医院胸外一科,河南 郑州 450052)
性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(sex-determining region Y-related high mobility group box 4,SOX4)是SOX家族的主要成员,在调节细胞干性、增殖、分化和调控胚胎发育、器官形成过程中起到关键性作用[1]。既往研究[2-5]发现,SOX4在恶性肿瘤组织中频繁高表达,参与了结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等多种肿瘤的发生、发展。在肺癌中,SOX4充当何种角色尚不清楚,能否将之作为肺癌诊断、预后标志物及新的治疗靶点有待研究。本研究旨在探讨SOX4在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义。
1.1 临床资料收集郑州大学第一附属医院2018年10月至2018年12月收治的63例接受肺癌根治术患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本,所有患者均未接受术前化疗或放疗。63例患者年龄43~75岁,中位年龄62岁。男39例,女24例。吸烟33例,不吸烟30例。病理类型:腺癌42例,鳞癌21例。分化程度:高分化13例,中分化20例,低分化30例。临床分期:I期15例,Ⅱ期20例,Ⅲ期28例。有淋巴结转移38例,无淋巴结转移25例。
1.2 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测SOX4 mRNA采用qPCR检测NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4 mRNA表达。具体过程:根据Trizol操作说明书进行总RNA抽提,提纯后,逆转录合成互补DNA,-80 ℃保存备用。SOX4上游引物:5’-CTCAAAGACAGCGACAAGATCC-3’;下游引物:5’- ACTTGTAGTCGGGGTAGTCAGC -3’。使用SYBR Green qPCR Mix (Universal)进行SOX4 mRNA检测。用2-△△Ct法处理测得的Ct值,得出mRNA的相对表达量。实验重复3次。
1.3 免疫组化染色检测SOX4蛋白采用免疫组化染色检测NSCLC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中SOX4 mRNA表达。具体过程:对组织标本进行包埋、脱蜡、抗原修复、封闭处理后分别予以一抗(SOX4抗体,1400)、二抗(羊抗鼠IgG,1400)处理,染色后脱水、封片、观察。……