猕猴桃细菌性溃疡病可视化LAMP检测方法的建立与应用

王一波，祝 山，郭文通，秦虎强，刘 巍，徐亮胜，黄丽丽

(西北农林科技大学 植物保护学院，陕西杨凌 712100)

猕猴桃是一种重要的经济作物，凭借其风味独特、维生素C含量高、营养价值丰富，已经成为很多地区脱贫致富的支柱产业[1]。但是，由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonassyringaepv.actinidiae，Psa)引起的猕猴桃细菌性溃疡病是制约猕猴桃产业发展的重大病害，已造成严重的经济损失[2]。该病害发展迅速、危害严重、防治困难，已在亚、欧、澳、南美洲等地的主要猕猴桃产区广泛流行，成为备受关注的世界性病害。猕猴桃细菌性溃疡病在中国主要分布于陕西、四川、河南、贵州、浙江等省[3]。

随着分子生物学技术的发展，国内已建立多种基于PCR原理的Psa分子检测方法。例如，Yao等[4]建立的四川省Psa病原菌特异性检测方法；谢锦添等[5]建立的Psa实时荧光定量PCR检测方法等。但这些检测方法由于依赖价格昂贵的检测设备，专业的检测步骤，使其广泛应用受到限制。因此，生产中亟需一种灵敏度、特异性、稳定性能与PCR检测相当，且不受实验设备限制的检测方法。

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是在2000年由Notomi等[6]建立的一种等温扩增技术。凭借其特异性强、灵敏度高、操作简单、检测成本低等优点，LAMP检测技术被广泛应用于各个领域，逐渐成为可以替代传统PCR检测的新检测技术。LAMP反应过程依赖于靶标DNA6个独立的区域，因而其特异性非常高。同时，LAMP反应在等温条件下进行，使用能够维持稳定恒温的设备(水浴锅、保温桶等)即可完成，而不需要PCR仪等昂贵设备，从而使检测成本大幅降低，应用范围显著扩大；……