基于类芬顿反应构建磁性纳米粒治疗卵巢癌：体外实验

周炜程，李 锐*，张 亮，黄 菊

(1.重庆医科大学附属第三医院超声科，重庆 401120；2.重庆医科大学附属第二医院超声科 超声分子影像重庆市重点实验室，重庆 400010)

近年来开发了多种特异性治疗肿瘤方式[1-2]。在低pH的肿瘤微环境中，类芬顿反应可通过金属离子与过氧化氢(hydrogen peroxide， H2O2)发生氧化反应，产生活性氧而诱导肿瘤细胞死亡[3-4]，但肿瘤区域H2O2浓度过低可使类芬顿反应无法达到预期效果；葡萄糖氧化酶(glucose oxidase， GOx)可通过消耗被大量转运的葡萄糖产生H2O2而解决上述问题[5-6]。本研究以聚乳酸羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)， PLGA]包裹四氧化三铁(Fe3O4)和GOx，借助实体瘤的高通透性、滞留效应及外部磁场吸引，使其到达肿瘤区域并释放携带物，在消耗葡萄糖的同时诱导细胞死亡并增强光声信号，为实现诊疗一体化提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器 PLGA(PLGA-COOH聚合比50∶50，济南岱罡生物科技有限公司)，聚乙烯醇(polyvinyl alcohol， PVA， Sigma)，异丙醇(iso-propyl alcohol， IPA， Sigma)，油酸改性Fe3O4纳米粒(Ocean Nanotech)，GOx(Sigma)，考马斯亮蓝试剂盒(上海碧云天生物技术公司)，细胞计数试剂盒(cell counting kit-8， CCK-8，Dojindo)，二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide， DMSO， Sigma)，3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine， TMB， Sigma)，2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate， DCFH-DA， Sigma)，人卵巢癌SKOV3细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所)。

Sonics 630-0435声振仪，DF-101磁力搅拌器(上海增森仪器科技有限公司)，Synergy H1多功能酶标仪，Nikon Ti2倒置荧光显微镜，Malvern Zetasizer Nano ZS90光粒径测量仪，Nikon A1+/A1R+共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscopy， CLSM)，Hitachi S-3400N电子显微镜，Visual Sonics Vevo LAZR光声成像系统。

1.2 制备纳米粒 以双乳化法制备Fe3O4@PLGA-GOx纳米粒。称取50 mg PLGA，溶于3 ml二氯甲烷，充分溶解后加入100 μl Fe3O4溶液(17.61 mg/ml)及200 μl GOx溶液(50 mg/ml)，以100 W功率超声混合3 min；加入4% PVA溶液8 ml，继续超声混合2.5 min；加入10 ml IPA溶液后，以磁力搅拌3 h；以双蒸水多次离心洗涤，得到磁性Fe3O4@PLGA-GOx纳米粒(Fe3O4@PLGA-GOx组)，4℃保存。……