蔡洲,肖琛嫦,梅燕
(武汉科技大学城市学院医学部,湖北 武汉 430083)
肺腺癌是一种非小细胞肺癌,主要起源于支气管黏膜上皮[1-2]。目前,肺腺癌的确切发病机制尚不十分明确,大量的医学资料表明吸烟、环境污染、放射、肺部慢性疾病及内分泌失调等均可能诱发肺腺癌发生。S100A6 属于S100 蛋白家族,能够通过靶蛋白参与肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡,是一种与肿瘤发生和发展有关的重要标志物[3-4]。南岩东[5]等人在研究中提到,S100A6 在判断正常肺组织和肺癌方面具有高灵敏度和特异度,诊断准确率由于其他肿瘤标志物,可作为肺腺癌早期诊断与预后判断的参考指标。本研究将肺腺癌细胞组织的表型特征作为研究重点,旨在明确S100A6 基因表达对肺腺癌细胞组织的影响,为临床上确定S100A6 的主要作用机制提供参考依据,现报道如下。
收集2017 年5 月至2018 年2 月某院收治的34例肺腺癌患者的正常肺组织、癌旁组织及肺腺癌组织标本,其中男18 例,女16 例,年龄23~78 岁,平均(52.6±3.8)岁。A549 肺腺癌细胞由上海中科院提供。
1.2.1 肺腺癌细胞转染方法
将A549肺腺癌细胞接种于RPMI1640培养液中(含100g/L 胎牛血清+100U/mL 青霉素+100μg/mL 链霉素),培养一段时间后将对数生长期细胞接种于培养板,细胞融合60%后转染携带S100A6 基因+绿色荧光蛋白的质粒,构建S100A6 阳性组。
1.2.2 S100A6 蛋白表达量检测方法
在标本匀浆中加入细胞裂解液,离心15min 后取上层清液,采用BCA 蛋白定量法进行测定。使用聚丙烯酰胺进行常规电泳,使用一抗4℃下孵育过夜,二抗室温条件下孵育2h,采用化学荧光发光法进行显色处理。……