miR-4496靶向LAMP3在结直肠癌细胞增殖和侵袭中的作用

刘 伟,刘佳佳*,周 杨,郑利枝,高艳伟

(1内蒙古自治区人民医院放射治疗科,呼和浩特 010010;2内蒙古自治区人民医院胃肠外科;*通讯作者,E-mail:samandhua398@126.com)

结直肠癌是消化系统中常见的恶性肿瘤,发病率和病死率均较高[1]。结直肠癌早期症状不明显,发现时已处于中晚期,患者往往预后较差[2]。阐明结直肠癌发病的分子机制对于寻找新的靶向治疗具有重要意义。微小RNA(miRNA)长度通常为19-25个核苷酸,是一种非编码小分子RNA[3]。miRNA主要通过特异性结合靶基因信使RNA(mRNA),切割mRNA或抑制其翻译为蛋白,从而发挥调控基因表达的重要作用[4]。miRNA广泛参与调控肿瘤细胞的生长、侵袭、衰老等活动[5]。有研究表明,miR-4496在前列腺癌和胶质母细胞瘤中可抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为[6,7]。miR-4496在结直肠癌中的作用并不清楚。本研究通过检测结直肠癌细胞株中miR-4496的表达情况,观察miR-4496对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响,探讨miR-4496在结直肠癌细胞中的分子作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

正常的肠黏膜上皮细胞HIEC以及结直肠癌细胞株SW480、HT-29、LoVo、HCT116均购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所;SYBR Premix Ex Taq试剂盒购于日本TaKaRa公司;DMEM/F12培养基和胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司;mimic-NC、miR-4496 mimic、野生型和突变型的LAMP3荧光素酶质粒购自广州市锐博生物科技有限公司;MTT试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司;双荧光素酶报告试剂盒购自美国Promega公司;Trans-well小室购自美国Corning公司;Matrigel胶、Lipofectamine 3000购自美国Invitrogen公司;一抗β-Tubulin、LAMP3、CDK7、Cyclin H、Vimentin、ZEB-2购自美国Cell Signaling Technology公司;辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的二抗羊抗兔购自武汉博士德生物公司。

1.2 细胞培养和转染

正常的肠黏膜上皮细胞和结直肠癌细胞株在含10% FBS的DMEM/F12培养基中培养,均在37 ℃、5%CO2培养箱中培养。……