小鼠Cdc25B突变型S15A荧光表达载体的构建及鉴定

冯少青,孟 峻

(1内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断学教研室,呼和浩特 010059;2内蒙古医科大学附属医院检验科;*通讯作者,E-mail:nmfrank@163.com)

Cdc25B属于细胞分裂周期25(cell division cycle 25,Cdc25)磷酸酶家族,它可以通过激活细胞周期依赖性蛋白激酶(CDKs)来驱动细胞周期,并且可以参与细胞周期检查点的调控,其活性与其亚细胞定位和磷酸化状态有直接关系[1,2]。在哺乳动物细胞周期调控过程中,Cdc25B主要在有丝分裂G2-M过渡阶段激活CDK1-cyclin B而发挥作用[3]。Cdc25B已被证实是调节细胞周期进程的关键因子,它作为一种Thr/Tyr双特异性的保守性磷酸酶,对无活性的前有丝分裂促进因子磷酸酶发挥双重特异性作用,使之被修饰为具有活性的去磷酸化形式,进而恢复有丝分裂[4]。Cdc25B也被证实参与中心体复制和调控微管成核[5],并且是红细胞前体细胞周期的关键调节因子,作为靶基因参与红细胞的生成和分化[6]。

细胞周期失调是人类癌症的一个共同特征,它至少会导致癌症发展的两个特征,即不受控制的细胞增殖和基因组不稳定[7,8]。而Cdc25B在细胞周期调控中发挥重要作用,并且Cdc25B的过表达已在多种人类癌症中被观察到,并与较差的临床预后相关[9],这表明对Cdc25B的研究有助于更好地了解癌症的作用机制及发现新的癌症治疗靶点。Cdc25B的过表达是一个复杂的过程,其中S15A可能是造成其磷酸化的关键位点。此研究旨在构建Cdc25B的突变型Cdc25B(S15A)的荧光质粒,为进一步研究Cdc25B及其突变体在小鼠受精卵G2/M期的作用做准备。

1 材料与方法

1.1 仪器与软件

超……