长链非编码RNA DGUOK-AS1对肺鳞癌增殖及凋亡的影响

曹艳红，王保龙

在中国，肺癌是相当常见的恶性肿瘤，其发生率和病死率均很高。非小细胞肺癌大约占肺癌类型的85%，而肺鳞癌又是非小细胞肺癌的主要病理类型，且与肺腺癌相比，肺鳞癌发病机制的研究和治疗明显滞后。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)属于一组没有蛋白质编码能力的转录本，全长200多个核苷酸,具有保守的二级结构，可与蛋白质、DNA和RNA相互作用，通过多种机制在多种层面调控基因的表达。已有文献报道，lncRNA参与人类多种癌症的发生和发展，与细胞周期、信号转导以及细胞凋亡等途径密切相关。通过TCGA数据库筛选，与正常组织相比，lncRNA DGUOK-AS1在肿瘤组织中表达量异常升高,采用RNA干扰技术下调lncRNA DGUOK-AS1的表达，研究DGUOK-AS1对肺鳞癌增殖和凋亡的影响及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

肺鳞癌NCI-H520 和SK-MES-1细胞株均购自上海生命科学研究院；胎牛血清(PN血清和BI血清)、DMEM高糖培养基、RPMI 1640培养基以及0.25%细胞胰酶消化液均购自合肥飒英斯生物科技有限公司；TRIzol试剂和Lipofectamine 2000均购自美国 Invitrogen公司；DGUOK-AS1引物、siRNA及阴性对照siRNA-NC均购自合肥通用生物公司；荧光定量PCR检测试剂盒购自日本Takara公司；CCK-8检测试剂盒购自日本同仁公司；Annexin V/PI法细胞凋亡检测试剂盒购自德国Biolegend公司；PCNA、Bcl2、Bax、cyclin D1、c-myc和β-cantenin抗体均购自武汉三鹰生物技术有限公司；RNA质核分离试剂盒购自美国 Invitrogen公司。

1.2 方法

1

.

2

.

1

细胞培养 在37 ℃、5% CO的培养条件下，用RPMI 1640培养基培养NCI-H520细胞，用DMEM高糖培养基培养SK-MES-1细胞，当培养皿内细胞的融合度约90%时，则进行细胞传代及后续相关实验。

1.2.2

细胞瞬时转染 细胞传代时，将NCI-H520和SK-MES-1细胞接种于6孔……