吗啡预处理对缺血再灌注损伤后大鼠心脏中Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

朱 瑞，金世云，郭成晓，张 野

体外循环下行心脏手术是多种心脏疾病如心瓣膜病、冠心病及先天性心脏病等主要治疗手段。然而实施体外循环后，心脏常经历全心缺血及再灌注过程，不可避免会发生心肌缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI)。吗啡作为临床经典的阿片类镇痛药，在基础研究及临床实践中均表明可减轻心肌IRI，虽然目前对吗啡心肌保护作用的研究较为广泛，但其确切机制仍未能完全阐明。细胞凋亡是IRI过程中主要机制之一，Caspase-3作为细胞凋亡中关键调控因子，其是否参与吗啡降低心肌细胞凋亡水平，减轻IRI目前尚不明确。该研究通过制备大鼠全心缺血再灌注损伤模型，观察吗啡预处理(morphine preconditioning, MP)对全心缺血再灌注后心肌中Caspase-3表达及细胞凋亡的影响，以进一步明确MP心肌保护作用的机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

盐酸吗啡注射液(1 ml：10 mg，批号：190104-2，东北制药集团沈阳第一制药有限公司)；氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride，TTC)(批号：129K1867V，美国Sigma公司)；乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；兔抗Caspase-3单克隆抗体(美国Cell Signaling公司)；鼠抗β-actin单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；Langendorff离体心脏灌注系统(安徽淮北正华有限责任公司)；Power Lab数据采集装置(澳大利亚AD公司)。

1.2 实验动物及全心缺血再灌注损伤模型制备

健康雄性成年SD大鼠，体质量为220～260 g，由安徽医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(皖)2017-001。参照参考文献制备全心离体缺血再灌注损伤模型，SD大鼠断头处死，剔除非心脏组织，迅速取出心脏置于4 ℃ K-H液(mmol/L：118.5 NaCl、4.7 KCl、1.2 MgSO、25.0 NaHCO、1.2 KHPO、11.0葡萄糖、2.5 CaCl)中，立刻悬挂于Langendorff灌注装置上，采用9.8 kPa恒压逆行灌注K-H液。……