去甲肾上腺素对腹外侧视前区神经元的作用途径研究

邴利洁，张平平，程 娟，张乐莎，王烈成

腹外侧视前区(ventrolateral preoptic nucleus，VLPO)是促进睡眠的中枢,其在睡眠启动中起着重要作用。在中枢神经系统中，去甲肾上腺素(noradrenalin，NA)主要由蓝斑(locus coeruleus，LC)的神经元释放，是觉醒的重要递质。曾有学者提出促睡眠神经元与促觉醒神经元相互抑制的假说，其控制着睡眠觉醒之间的时相转换来维持睡眠或觉醒状态。80% 的 VLPO 神经元为γ-氨基丁酸(GABA)能神经元和甘丙肽能神经元，向脑中与觉醒相关的众多区域发出纤维投射，调节睡眠觉醒时相间的相互转换，是调节睡眠-觉醒节律的关键因素。有研究表明，在VLPO区域中促睡眠神经元约占2/3，中间神经元约占1/3。NA能够兴奋或抑制VLPO中两种类型神经元的兴奋性。有文献表明促睡眠神经元的激活有助于睡眠。然而，目前NA对VLPO区域的这两类神经元的兴奋和抑制作用途径是直接作用途径还是间接作用途径未见报道。该研究利用全细胞脑片膜片钳技术和RT-PCR检测，探究NA对VLPO两种类型神经元的兴奋或抑制作用的途径。

1 材料与方法

1.1 动物与主要试剂

实验动物选用清洁级健康C57BL/6小鼠(15～21 d)，购自安徽医科大学实验动物中心，饲养于安徽医科大学基础生理学实验室动物房。饲养环境：室温22～24 ℃，相对湿度40%～60%，人工控制12 h昼夜节律，自由摄食和饮水。主要试剂有：NA购自天津金耀公司，CNQX购自美国abcam公司,AP5和 flumazenil购自美国Sigma公司，逆转录试剂盒购自美国promega公司。

1.2 主要仪器

MultiClamp 700B放大器、Axon Digidata 1550A数模转换器(美国Axon公司)；振动切片机(德国Leica公司)；MODEL P-97电极拉制仪、玻璃电极(德国SUTTER设备公司); 95% O/5% CO的混合气(合肥虹珏公司)。……