沉默HE4对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响

王 韬，王一飞，李 磊，田宝华，李 璐，费建东

结肠癌是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一。人附睾蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)在肺癌、乳腺癌、卵巢癌和子宫内膜癌中高表达，并且参与了肿瘤的恶性增殖和进展。HE4在结肠癌中的报道相对较少，Kemal et al研究表明，结直肠癌患者外周血清中HE4表达水平明显高于健康人，对结直肠癌的早期诊断有一定价值。赵渊博 等应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质芯片联合激光显微切割技术，证实了HE4是大肠癌肝转移的早期标志蛋白。Janus激酶/信号转导子和转录激活子3(janus kinase/signal transducers and activators of transcription 3，JAK/STAT3)信号通路与结肠癌细胞的进展密切相关，HE4可以靶向调控JAK/STAT3信号通路。该研究旨在探讨沉默HE4对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

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细胞 结肠癌细胞株Caco-2、SW480、HT-29、HCT-116和正常结肠上皮细胞株HCoePic均购自中科院上海细胞库。

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仪器 胎牛血清和DMEM培养基购自上海生工生物工程股份有限公司；BCA蛋白定量检测试剂盒、凝胶快速制备试剂盒、SP免疫组化试剂盒均购自武汉艾美捷科技有限公司；HE4、JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、β-actin内参抗体均购自北京安诺伦生物科技有限公司；LipoFiterTM脂质体转染试剂购自上海科维创生物科技有限公司；HE4 si-RNA和si-control均购自上海吉马制药有限公司；CCK-8试剂盒、Transwell小室、Annexin-V-FITC/PI凋亡检测试剂盒均购自上海沪震实业有限公司。

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试剂 Axio Imager M2M全自动显微镜为德国卡尔蔡司公司生产；164-5050型电泳仪、CFXConnect荧光定量PCR仪和680型酶标仪均为美国Bio-Rad公司生产；VILBER INFINITY 3026凝胶成像系统为法国VILBER公司生产；FACSCanto Ⅱ型流式细胞仪为美国BD公司生产。

1.2 细胞培养