CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

刘 静，李东宁，张晓岚，廖久棋，程茜南

黑色素瘤是已知的最恶性的皮肤癌，由正常黑色素细胞恶性转化形成，在过去的几十年中，其全球发病率稳步上升，病死率极高。如果早期诊断和治疗，黑色素瘤可以治愈，但是，转移性黑色素瘤很难治疗，大多数晚期黑素瘤对放疗和化疗反应不良，目前尚无有效的方法抑制该癌的转移扩散。转移性恶性黑色素瘤患者中位生存期约7.5个月，5年生存率约为5%。因此，探讨黑色素瘤转移的机制对改善黑色素瘤患者预后具有重要意义。

CD98是一种异二聚体跨膜糖蛋白，由重链和轻链组成，在人体内除血小板外各组织广泛分布。CD98在肿瘤细胞等增殖活跃细胞上过度表达，与肿瘤细胞的增殖和肿瘤的发生发展过程密切相关。已有研究表明，CD98在黑色素瘤中高表达，可作为黑色素瘤的生物标志物。但关于CD98对黑色素瘤的具体作用机制并不明确，该研究旨在探究CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。

1 材料与方法

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1 主要试剂

DMEM培养基(10569-010)、胎牛血清(10099-141)、胰蛋白酶(15050-057)和青-链霉素(15140-122)均购自美国赛默飞世尔科技公司；皮肤黑色素瘤细胞B16-F10购自国家模式与特色实验细胞资源库；Transwell(K914-100)购自武汉艾美捷科技有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0010)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(A0208)和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(C1062L)均购自上海碧云天生物技术有限公司；兔抗单克隆抗体Ki67(ab15580)、Bax(ab104156)、Bcl-2(ab59348)、Caspase-3(ab13847)、cleaved Caspase-3(ab2302)、PI3K(ab191606)、p-PI3K(ab182651)、AKT(ab106693)、p-AKT(ab192623)和GAPDH(ab9485)均购自英国Abcam公司。

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2 细胞培养

将B16-F10细胞培养于37 ℃，5% CO恒温培养箱中用高糖DMEM培养基(含10%胎牛血清和1%青-链霉素)培养，每3 d更换1次培养基，收集细胞时用0.25%胰蛋白酶消化，选用对数生长期细胞为试验用细胞。……