贵州茶树种质资源遗传多样性、群体结构和遗传分化研究

安红卫， 宋勤飞， 牛素贞

(贵州大学 茶学院， 贵州 贵阳 550025)

茶是世界上三大饮料中有益人体健康的饮品[1-2]，具有很高的营养和药用价值。茶的丰富风味由近700种生物活性化合物组成，如儿茶素、茶氨酸、咖啡因和挥发物[3-4]。茶树[Camelliasinensis(L.)O. Kuntze]，原产中国西南地区，而贵州位于茶树原产地的中心地带[5-6]，该地区独特的地貌特征、多样的气候、丰富的降水及茶树的异花授粉特性，保存了丰富的野生茶树、古老地方品种和具有不同形态特征的现代地方品种[7]，因此对贵州境内茶树种质资源的分布状况及遗传多样性的研究具有重要意义。本研究采用EST-SSR分子标记，对贵州省境内的144份茶树种质资源进行遗传多样性、群体结构及遗传分化分析，探索贵州茶树种质资源的分布规律及保护与利用方向。

1 材料与方法

1.1 材料

以144份贵州茶树种质资源为材料(表1)。参考陈亮[8]提出的茶树分类系统，144份茶树种质资源包含有14个秃房茶(C.gymnogyna)，80个茶[C.sinensis(L.) O. Kuntze]，39个大厂茶[C.tachangensis(F.C.Zhang)]，11个疑似大理茶[C.taliensis(W.W.Smith)]；海拔500～1 000 m有23个，海拔1 000～1 300 m有59个，海拔1 300～1 500 m有34个，海拔1 500 m以上有28个；根据地区分类则黔中地区11个，黔北地区36个，黔南地区27个，黔东南地区18个，黔西南地区52个。

表1 一百四十四份贵州茶树种质资源信息

1.2 试验方法

1.2.1茶树基因组DNA提取及EST-SSR引物的选择

采用改进的CTAB法[9]提取144个茶树种质资源基因组DNA。所用引物(表2)参考乔婷婷等[10-11]研究中的引物，从中共筛选出68条多态性好、条带清晰的引物开展研究。

表2 SSR引物信息

1.2.2 EST-SSR扩增技术体系及产物检测

参考刘本英[12]的方法进行PCR扩增，在DYY-6C电泳仪和垂直电泳槽DYCZ-30上进行凝胶电泳，120 V电压下电泳120 min，电泳后银染显色。……