牛黄体细胞与卵泡颗粒细胞差异基因的筛选

孟金柱，吴震洋，安清明，赵园园

(铜仁学院，贵州 铜仁 554300)

雌性动物卵泡颗粒细胞(GCs)通过特异表达细胞色素P450芳构化酶(CYP19A1)，将膜细胞(TCs)分泌的雄激素转化为雌激素(E2)，从而促进优势卵泡发育成为排卵卵泡[1]。排卵卵泡在促黄体素(LH)峰的作用下发生破裂，卵丘-卵母细胞复合体得以释放，而卵泡壁上的GCs和TCs分别分化成为大黄体细胞(LLCs，直径大于25 μm)和小黄体细胞(SLCs，直径12～25 μm)[2]。在牛和羊卵巢上，LLCs和SLCs都可以分泌孕激素(P4)，但LLCs由于对LH有一定的类固醇生成反应，因此其分泌P4的能力是SLCs的20倍[3-4]。

通过高通量测序技术对牛不同大小卵泡中GCs和TCs进行基因表达谱分析，发现GLDC、MGARP、GPX3、CHST8等细胞外基质基因是GCs的潜在标记物[5]。对不同品种的牛在不同温度应激下的卵母细胞和卵丘细胞进行高通量测序表明，不同牛品种的卵母细胞在组织和细胞死亡方面存在很大差异；在卵丘细胞中，品种和温度都会影响mRNA的丰度，涉及细胞组织和氧化应激[6]。目前，有文献报道了牛GCs和TCs在黄体生成素(LH)峰和卵泡内前列腺素峰出现时的短期变化[7]，但从卵泡到黄体的转变机制尚不明晰。本研究通过筛选GEO数据库GSE83524 RNA-seq表达谱中LLCs和GCs之间的差异表达基因，应用生物信息学分析结合实时荧光定量PCR验证，为详述这2种细胞在卵巢生理学中的功能、深入研究细胞特异性及GCs细胞向LLCs的分化机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料在贵州省铜仁市万山区肉牛屠宰场选取10头健康思南黄牛，屠宰后摘除卵巢，迅速置于4℃灭菌杜氏磷酸缓冲液(DPBS)中并运回实验室。……