不同海拔灯盏细辛中灯盏花乙素的含量分析

王静怡 郭 昕 冯 春 杨 利 何耀莹 段红吉 武正才

云南植物药业有限公司，云南 昆明 650109

灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.) Hard.-Mazz]的干燥全草，主要分布于我国云南、贵州、四川等地，从采集样品的最低海拔695 m，到最高海拔4041.6 m均有生长，是一种民间常用中药。灯盏细辛具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络等功效。临床主要用于治疗缺血性脑血管疾病、冠心病、心绞痛等症，其疗效较好，毒副作用小，运用范围广。灯盏细辛主要有效成分为黄酮类化合物灯盏花乙素。由于不同海拔的灯盏细辛药材中主成分灯盏花乙素含量差异较大，为了采收到质量较好的药材，对药材产地的选择十分重要。通过对不同海拔的药材进行研究比较，找到收购的最佳产地及较适合于种植灯盏细辛的地理位置。

1 仪器和试药

Agilent-1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，BUCHI Rotavapor R-200旋转蒸发仪(瑞士步琪)，BP221D电子分析天平(德国塞多利斯)， HS6150D 超声波清洗器 (天津恒实)， 0.5～5.0、6.4～8.0精密pH试纸(上海三爱思试剂有限公司)；灯盏花乙素对照品(中国食品药品检验研究院，批号110842-201508)，乙醇(色谱纯)，其它试剂均为分析纯。9批不同产地不同海拔灯盏细辛药材样品(详见灯盏细辛药材样品来源表1)。

2 方法与结果

2.1 提取方法工艺流程 灯盏细辛粉→乙醇回流→减压浓缩→碱溶除胶→滤过→酸沉→滤过→沉淀醇溶→干燥→粗品→精制→成品。

2.2 提取操作方法 取灯盏细辛粉200 g，用70%的乙醇回流提取3次(溶剂倍量5 N、5 N、4 N，回流时间2 h、2 h、1 h)，减压浓缩至(浸膏∶生药=1∶1)，用饮用水稀释至浸膏2倍量，用10%NaOH溶液调pH7.0～7.2，静置过夜，胶质用120目筛网滤除，滤液用10%H2SO4调pH2.0～2.5，静置过夜，滤过，沉淀用乙醇洗涤，干燥即得灯盏花素粗品。粗品用20倍纯化水溶解，用10%NaOH溶液调pH 7.0～7.2，滤过，滤液用10%H2SO4调pH 2.0～2.5，静置过夜，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤，干燥即得灯盏细辛提取物。

表1 灯盏细辛药材样品来源

2.3 含量方法学考察与结果

2.3.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，250 mm×4.6 mm,5 μm十八烷基键合硅胶色谱柱。流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60)，流速为每分钟1.0 mL；柱温40 ℃；检测波长335 nm。理论塔板数按灯盏花乙素峰计算不得低于5000。

2.3.2 对照品溶液的制备 取灯盏花乙素对照品10 mg,精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超声处理(功率300 W，频率50 KHz)45 min，取出，放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品10 mg,精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超声处理(功率300 W，频率50 KHz)45 min，取出，放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 标准曲线的绘制 精密称取灯盏花乙素对照品约10 mg置100 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理，以甲醇定容，取1、5、10、15、20 mL分别置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，精密吸取5 μL，按色谱条件依次进样，记录峰面积，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，灯盏花乙素的回归方程为Y=490816X+7770.9(r=0.9991),说明灯盏花乙素在0.2～4.0 μg线性良好。

2.3.5 精密度考察 取灯盏花乙素对照品溶液，连续进样6次，测得峰面积，其RSD为0.69%，方法精密度良好。

2.3.6 重复性考察 取同一供试样品6份，精密称定，按样品测定项下的方法进行含量测定。测得供试品RSD为1.79%，表明供试品的重现性良好。

2.3.7 稳定性考察 取同一灯盏细辛样品溶液，分别在0、1、2、4、6、8 h依次注入高效液相色谱仪进行分析，结果RSD为1.97%，表明供试品在8 h内稳定性良好。

2.3.8 加样回收率考察 精密称取已知含量的灯盏细辛提取物样品(3#号样品)6份，分别精密加入一定量的灯盏花乙素对照品，按2.3.3制备供试品溶液，根据色谱条件进样，平均回收率为98.73%，RSD为1.08%，表明该方法回收率较好，方法可行。

表2 加样回收率

2.3.9 样品含量测定 取不同海拔的灯盏细辛提取物样品，按照含量测定 “2.3.3”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3 结果

3.1 不同海拔的灯盏细辛药材中提取灯盏花乙素的收率及含量 相关数据详见表3。

表3 样品结果

3.2 不同海拔灯盏细辛药材中提取的灯盏花乙素收率折线图 如图1所示。

3.3 不同海拔灯盏细辛药材中灯盏花乙素含量图 如图2所示。

4 讨论

从图1可以看出，海拔在1100～2126 m之间生长的4个灯盏细辛样品中灯盏细辛提取物的提取收率为8‰～12‰，收率较高。海拔在1000 m以下2162 m以上生长的灯盏细辛样品中灯盏细辛提取物的提取收率为5‰～8‰，收率较低。从图2可以看出海拔在1100～2126 m之间生长的四个灯盏细辛药材中盏花乙素的含量为3.4%～5.3%，海拔在1000 m以下2162 m以上生长的灯盏细辛药材中灯盏花乙素的的含量为1.8%～3.3%。

本研究证明，不同海拔生长的灯盏细辛中灯盏花乙素的提取收率及含量有差异，且摸索出海拔较低或者海拔较高的地方生长的灯盏细辛中灯盏花乙素的提取收率和含量都不高，海拔在1000～2000 m左右生长的灯盏细辛药材中灯盏花乙素含量较高。适合种植灯盏细辛的最佳地理位置为海拔在1000～2000 m左右的地方。

各地收购的季节与当地的地理位置有关，温差、阳光照射时间都会影响灯盏细辛的采收时间。为了研究不同海拔生长的灯盏细辛中对灯盏花乙素的含量，在采收时期和采收地点应尽可能统一，采收时期都选择盛花期，采收的地点都选择向阳坡地。