携带角质细胞生长因子和低氧诱导因子-1α双基因减毒沙门菌的遗传稳定性

李欣，魏静，蒋如如，哈小琴

1.甘肃中医药大学临床医学院临床检验诊断学，甘肃 兰州 730030；2.中国人民解放军联勤保障部队第九四○医院检验科，甘肃 兰州 730050；

20世纪70年代提出了基因治疗的方法，近年逐步显示出良好的临床效果。多数情况下，基因治疗是将遗传物质导入靶细胞以达到治疗目的［1］。基因治疗由于少数患者出现严重副作用，使其应用受限，随着对基因相关分子和细胞机制的深入了解，研发了复杂的基因转移工具，极大提高了基因治疗的安全性和治疗效果［2］。

减毒沙门菌作为基因治疗的活载体，具有巨大的研发潜力，在人类和兽医学中应用广泛，随着对细菌的遗传学、生物学和致病机理的深入了解，使针对特定应用沙门菌构造的设计更合理［3］。本实验采用的减毒沙门菌为减毒伤寒沙门菌Ty21a，是目前唯一用于制备人类疾病预防产品的减毒疫苗株，可提高机体免疫力，安全性较高［4］。Ty21a的致病性虽较低，但仍具有较高的侵袭性，口服后可在胃肠道黏膜定植［5］。针对该特性，本课题组前期实验将角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor，KGF）及低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）基因连接至质粒p IRES-SEQ中，构建重组质粒p IRESHIF-IRES-KGF，电转入减毒沙门菌Ty21a中，成功构建了携带KGF及HIF-1α双基因的减毒沙门菌（Ty21a-pIRES-HIF-KGF，TPKH）。KGF可促进上皮细胞增殖，具有维持和恢复受损伤胃肠黏膜的完整性的作用［6］；HIF-1α可使缺氧组织细胞保持一定的氧浓度，使细胞能耐受低氧状态而存活［7］。由于质粒p IRES-SEQ含有氨苄青霉素（Amp）基因位点，TPKH既可在Amp（+）LB平板上生长，以此筛选阳性菌落，又可在Amp（-）LB平板上生长。……