lncRNA-CCAT1通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响

李沫宓 淑芳 王孝信（北华大学附属医院妇产科，吉林132011）

宫颈癌是全球最常见的女性恶性肿瘤之一，五年生存率较低［1］，严重威胁着女性健康。因而，寻找宫颈癌治疗和预后的新方法对提高宫颈癌的诊治水平具有重大意义。结肠癌相关转录因子1（colon cancer associated transcript-1，CCAT1）一种长链非编码RNA（lncRNA），在肿瘤的发生和发展中占有重要地位，可参与调控细胞周期、增殖、侵袭与转移等生物学功能。已有研究显示，lncRNA-CCAT1在宫颈癌组织中高表达，与患者肿瘤分期、肿瘤大小及预后相关，并且CCAT1可以促进宫颈癌HeLa和CaSki细胞增殖、侵袭和转移，并抑制其凋亡［2-3］。众所周知，自噬是肿瘤进展中的一个重要过程，然而CCAT1是否对宫颈癌自噬有调控作用目前尚不清楚。多项研究显示，CCAT1能够激活PI3K/Akt信号通路，而PI3K/Akt信号通路可进一步激活mTOR并抑制自噬的形成［4-6］。故推测CCAT1过表达可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制宫颈癌细胞自噬。因此，本研究拟通过向宫颈癌HeLa细胞中转染CCAT1过 表达质粒（pcDNA3.1-CCAT1），探讨CCAT1过表达对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响，并初步阐明其机制。

1 材料与方法

1.1 材料人宫颈癌HeLa细胞株购自上海中科院细胞库；DMEM培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司；CCAT1过表达质粒pcDNA3.1-CCAT1及其空载对照组质粒pcDNA3.1-vector均由汉恒生物科技（上海）有限公司构建；PI3K特异性抑制剂LY294002购 自 美 国MedChemExpress公 司；Lipo‑fectamineTM2000转染试剂、TRIzol RNA分离试剂均购自美国Thermo Fisher公司；CCK8检测试剂盒、单丹磺酰戊二酸（MDC）染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；逆转录试剂盒和荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；Beclin1抗体、p62抗体、LC3抗体、p-PI3K抗体、PI3K抗体、p-Akt抗体、Akt抗体、p-mTOR抗体、mTOR抗体和GAPDH抗体均购自美国Cell Signaling Technology公司；……