RITA通过ROS/Src/Stat3通路诱导肺鳞癌H226细胞凋亡

区豪杰，孙嘉，李华宇，董超，刘冰

肺癌在世界范围内发病率和病死率均位于各种恶性肿瘤之首［1］，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌的80%～85%。肺鳞癌是NSCLC 的亚型之一，约占30%。目前临床上针对表皮生长因子受体（EGFR）和间变性淋巴瘤激酶（ALK）等驱动基因的靶向治疗药物对于肺鳞癌的治疗效果始终欠佳，且预后较差［2］，故亟需研发治疗肺鳞癌的有效药物。肿瘤凋亡和P53再生化合物（RITA）是一种小分子抗肿瘤药物，对肿瘤细胞具有较强的杀伤作用［3］。相比传统化疗药物，RITA 结构更加稳定，在肿瘤细胞内作用时间更长，血药浓度更高［4］。既往研究认为RITA 能够与P53 结合并增强P53 介导的抑癌效应，诱导淋巴瘤［5］、人结肠癌［6］、慢性粒细胞白血病［7］等多种肿瘤细胞的凋亡。更重要的是，RITA能独立于P53引起肿瘤细胞内活性氧（ROS）增多，导致其发生氧化应激，进而诱导细胞凋亡［8-9］。目前RITA 对肺鳞癌细胞的作用尚少见研究报道，本研究拟明确RITA对肺鳞癌细胞的作用，检测其对ROS产生及其下游信号的影响以探讨其作用机制，为抗肺鳞癌新药研发提供新的科学依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 RITA（结构式见图1）、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）购自MCE公司。RPMI-1640培养基、胎牛血清、Trypsin-EDTA（0.25%）、Trypsin（不含EDTA，0.25%）均购自Gibco公司。苯甲基磺酰氟（PMSF）、磷酸盐缓冲液（PBS）、ECL 发光液购自Biosharp 公司。噻唑蓝四唑溴化铵（MTT）、ROS 检测探针 DCFH-DA 购自 Sigma-Aldrich 公司。Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购自贝博生物科技公司。BCA 蛋白定量试剂盒购自Thermo Scientific 公司。SDSPAGE蛋白上样缓冲液购自Mikx公司。P-Src、Src、转录信号转换器和激活因子3（Stat3）、P-Stat3、Bim、Mcl-1、Survivin、Bax 及 B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）等一抗抗体购自 ABclonal 公司。……